重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的高效表达与纯化

来源 :生物加工过程 | 被引量 : 0次 | 上传用户：kby0227

【摘要】

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利用质粒pET-22b（＋）为表达载体，成功构建了高效表达N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的基因工程菌BL21-pET-22b（＋）-argE。研究了该菌的最适超声破壁条件及硫酸铵分级沉淀的最适范围，并以金属螯

【作者】

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陈悦李环姚忠韦萍

【机构】

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南京工业大学制药与生命科学学院

【出处】

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生物加工过程

【发表日期】

：

2006年4期

【关键词】

：

N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌亲和层析纯化 N-acetylomithine deacetylase genetic engineering str

【基金项目】

：

国家973项目基金资助（编号2G03CB7160004）

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利用质粒pET-22b（＋）为表达载体，成功构建了高效表达N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的基因工程菌BL21-pET-22b（＋）-argE。研究了该菌的最适超声破壁条件及硫酸铵分级沉淀的最适范围，并以金属螯合亲和层析法纯化含有6-His-Tag的目的蛋白。结果表明：26℃诱导表达的菌体，最佳超声破碎条件为功率200W，超声时间为15min；目的蛋白主要存在于40％-50％硫酸铵沉淀中。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白，可以达到SDS-PAGE电泳纯，并显示单亚基相对分子质量为43000。纯化倍数为139

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