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【中图分类号】R855.1 【文献标识码】A 【文章编号】1550-1868（2015）02
【摘要】目的：总结布鲁氏菌新型疫苗表达及免疫原性检测情况。方法：选取7/L12核蛋白，其保守性非常高，通过予以试验，查看17.3 kDa蛋白在保护作用方面的基本情况，并给予真核细胞翻译起始因子3各项抗原预测方案。结果：以酶联免疫吸附测定法为主要方案，可以对滴度相对偏高的特异性抗体进行检测，同时WB也可以证明有特异性抗体形成。结论：国内布鲁氏菌新型疫苗表达实验还处于探索研究阶段，通过对酶联免疫斑点实验法以及流式细胞仪相关分析技术对布鲁氏菌新型疫苗各个细胞的免疫指标进行评价，有助于提升其利用效率以及安全性。
【关键词】布鲁氏菌； 新型疫苗； 表达； 免疫原性； 检测情况
布鲁氏菌本身为革兰阴性杆菌当中的一种特殊构成元素，可以直接寄生于人类和牲畜的细胞中，已经成为布氏菌病发生的主要病原体，会对人类健康以及畜牧业的健康发展造成直接威胁。布氏菌病本身发病率非常高，不仅有许多人会感染上布氏菌病，同时畜牧业也会受布氏菌病直接影响，给国家经济以及发展带来不良影响，因此对细菌传播进行有效控制十分关键，而且已经发展成为当前急需处理的难题之一。就布氏菌病来说，当前通常以19号疫苗对其进行预防，多在牛接种免疫中应用，而羊则主要接种Rev-1疫苗[1]。但是，这些疫苗在牛和羊当中的使用效率十分有限，研发、应用各种布鲁氏菌新型疫苗尤为重要。
1.资料与方法
1.1一般资料
本次研究活动的资料选取7/L12核蛋白，克隆载体是PGEM-T载体以及pET32a原核表达载体。实验细胞选择COS7细胞，培养基则选择RPMll640培养基，包含了胎牛血清10%，在百分之五的培养箱中对其进行培养，并将培养箱温度控制为37摄氏度。实验对象选择BALBC小鼠，其年纪在五周至八周之间，等级是二级。
1.2方法
1.2.1从猪布鲁氏菌、布氏杆菌中提取出基因组脱氧核糖核酸，并在50毫升YT液体的培养基中进行培养，温度设定为37摄氏度，转速是每分钟210r，培养时长是72小时。
1.2.2参照17.3kDa蛋白的基因序列，以四种蛋清的基底材料为参考对象，通过对在线引物设计软件进行合理应用，设计出引物。
1.2.3结合所需浓度在三角瓶内放置琼脂糖1.5g，并掺加tae缓冲液100毫升，用微波炉进行加热处理后，确保琼脂糖已经完全溶解。待溶液冷却约60摄氏度时，即可加入适量溴化乙锭，使溶液浓度达到每毫升0.5g。
1.2.4以透明胶带对胶状模具两头进行密封，并在其中一头插上一把梳子，在模具中倒进琼脂糖，将凝胶厚度控制在0.3厘米至0.5厘米左右。直至琼脂糖处于凝固状态以后，即可将梳子拔除，同时去除透明胶带，在电泳槽内放置凝胶。
1.3统计学处理
通过SPSS19.0统计学软件分析以及处理本组研究数据，通过（x±s）代表一般资料，通过卡方检验组间计数资料的对比，计量资料比较采用t检验，组间数据对比差异明显，具备统计学意义以P<0.05表示。
2.结果
研究发现，以布鲁氏菌为主要对象，从中对基因组脱氧核糖核酸进行提取，予以测序正确之后，分别将其克隆到pET32a原核表达载体，再予以诱导，使之重组蛋白得以有效表达出来。以酶联免疫吸附测定法为主要方案，可以对滴度相对偏高的特异性抗体进行检测，同时WB也可以证明有特异性抗体形成。与此同时，在对聚合酶链反应技术进行合理利用的基础上，有四种蛋白都扩增出了其编码基因，在片段长度方面，17.3kDa蛋白是477bp，L7/L12核蛋白是375bp，真核细胞翻译起始因子3是537bp，OMP16外膜脂蛋白是507bp。
3.討论
卡那霉素抗性基因以及pVAXl首次被应用于人类真核的表达载体当中，然而在表达效率方面尚未达到满意指标。对靶基因进行克隆之后，使之克隆至表达载体内，在确定表达的基础上，即可成为核酸疫苗[2]。pcDNA3.1质粒图谱本身为真核性质表达载体当中的一种常见类型，在创建真核细胞以及原核细胞的同时，Sp6启动的引物序列在真核表达模式的结构中可以得到有效应用，譬如多腺苷酸化信号以及CMV启动子等。
脱氧核糖核酸疫苗除了能够对APC基因蛋白产物表达进行有效捕捉之外，在包装或者是直接在体内注入后还可能会表达出抗原，并诱导机体形成免疫性应答。本次研究中，笔者将四种不同类型布鲁氏菌新型蛋白视作本研究重点对象，在对重组蛋白进行表达的基础上，构建出四个脱氧核糖核酸疫苗，待免疫目标达成后再予以评价[3]。评价结果发现，除了OMP16外膜脂蛋白、17.3kDa蛋白以及L7/L12核蛋白，其他各种蛋白在免疫原性方面都发挥着显著作用，因此其研究前景、应用前景都十分明朗。
在对免疫反应进行诱发之后发现，布鲁氏菌新型疫苗尚未达到强大标准，还需要更多专业人士参与研发和探索，通过对免疫反应进行有效激发，从而不断提升其免疫保护功效。
参考文献
[1]易新萍.流产布鲁氏菌疫苗A19-ΔVirB12变株生物学特性研究[J].中国人兽共患病学报，2013，29（09）：836-840.
[2]王真.流产布鲁氏菌疫苗候选株RB6生物学特性研究[J].中国畜牧兽医，2012，39（04）：174-177.
[3]王晶妍.抗菌药物对布鲁氏菌体外最低抑菌浓度研究[J].河南师范大学学报（自然科学版），2013，41（02）：136-138.
【摘要】目的：总结布鲁氏菌新型疫苗表达及免疫原性检测情况。方法：选取7/L12核蛋白，其保守性非常高，通过予以试验，查看17.3 kDa蛋白在保护作用方面的基本情况，并给予真核细胞翻译起始因子3各项抗原预测方案。结果：以酶联免疫吸附测定法为主要方案，可以对滴度相对偏高的特异性抗体进行检测，同时WB也可以证明有特异性抗体形成。结论：国内布鲁氏菌新型疫苗表达实验还处于探索研究阶段，通过对酶联免疫斑点实验法以及流式细胞仪相关分析技术对布鲁氏菌新型疫苗各个细胞的免疫指标进行评价，有助于提升其利用效率以及安全性。
【关键词】布鲁氏菌； 新型疫苗； 表达； 免疫原性； 检测情况
布鲁氏菌本身为革兰阴性杆菌当中的一种特殊构成元素，可以直接寄生于人类和牲畜的细胞中，已经成为布氏菌病发生的主要病原体，会对人类健康以及畜牧业的健康发展造成直接威胁。布氏菌病本身发病率非常高，不仅有许多人会感染上布氏菌病，同时畜牧业也会受布氏菌病直接影响，给国家经济以及发展带来不良影响，因此对细菌传播进行有效控制十分关键，而且已经发展成为当前急需处理的难题之一。就布氏菌病来说，当前通常以19号疫苗对其进行预防，多在牛接种免疫中应用，而羊则主要接种Rev-1疫苗[1]。但是，这些疫苗在牛和羊当中的使用效率十分有限，研发、应用各种布鲁氏菌新型疫苗尤为重要。
1.资料与方法
1.1一般资料
本次研究活动的资料选取7/L12核蛋白，克隆载体是PGEM-T载体以及pET32a原核表达载体。实验细胞选择COS7细胞，培养基则选择RPMll640培养基，包含了胎牛血清10%，在百分之五的培养箱中对其进行培养，并将培养箱温度控制为37摄氏度。实验对象选择BALBC小鼠，其年纪在五周至八周之间，等级是二级。
1.2方法
1.2.1从猪布鲁氏菌、布氏杆菌中提取出基因组脱氧核糖核酸，并在50毫升YT液体的培养基中进行培养，温度设定为37摄氏度，转速是每分钟210r，培养时长是72小时。
1.2.2参照17.3kDa蛋白的基因序列，以四种蛋清的基底材料为参考对象，通过对在线引物设计软件进行合理应用，设计出引物。
1.2.3结合所需浓度在三角瓶内放置琼脂糖1.5g，并掺加tae缓冲液100毫升，用微波炉进行加热处理后，确保琼脂糖已经完全溶解。待溶液冷却约60摄氏度时，即可加入适量溴化乙锭，使溶液浓度达到每毫升0.5g。
1.2.4以透明胶带对胶状模具两头进行密封，并在其中一头插上一把梳子，在模具中倒进琼脂糖，将凝胶厚度控制在0.3厘米至0.5厘米左右。直至琼脂糖处于凝固状态以后，即可将梳子拔除，同时去除透明胶带，在电泳槽内放置凝胶。
1.3统计学处理
通过SPSS19.0统计学软件分析以及处理本组研究数据，通过（x±s）代表一般资料，通过卡方检验组间计数资料的对比，计量资料比较采用t检验，组间数据对比差异明显，具备统计学意义以P<0.05表示。
2.结果
研究发现，以布鲁氏菌为主要对象，从中对基因组脱氧核糖核酸进行提取，予以测序正确之后，分别将其克隆到pET32a原核表达载体，再予以诱导，使之重组蛋白得以有效表达出来。以酶联免疫吸附测定法为主要方案，可以对滴度相对偏高的特异性抗体进行检测，同时WB也可以证明有特异性抗体形成。与此同时，在对聚合酶链反应技术进行合理利用的基础上，有四种蛋白都扩增出了其编码基因，在片段长度方面，17.3kDa蛋白是477bp，L7/L12核蛋白是375bp，真核细胞翻译起始因子3是537bp，OMP16外膜脂蛋白是507bp。
3.討论
卡那霉素抗性基因以及pVAXl首次被应用于人类真核的表达载体当中，然而在表达效率方面尚未达到满意指标。对靶基因进行克隆之后，使之克隆至表达载体内，在确定表达的基础上，即可成为核酸疫苗[2]。pcDNA3.1质粒图谱本身为真核性质表达载体当中的一种常见类型，在创建真核细胞以及原核细胞的同时，Sp6启动的引物序列在真核表达模式的结构中可以得到有效应用，譬如多腺苷酸化信号以及CMV启动子等。
脱氧核糖核酸疫苗除了能够对APC基因蛋白产物表达进行有效捕捉之外，在包装或者是直接在体内注入后还可能会表达出抗原，并诱导机体形成免疫性应答。本次研究中，笔者将四种不同类型布鲁氏菌新型蛋白视作本研究重点对象，在对重组蛋白进行表达的基础上，构建出四个脱氧核糖核酸疫苗，待免疫目标达成后再予以评价[3]。评价结果发现，除了OMP16外膜脂蛋白、17.3kDa蛋白以及L7/L12核蛋白，其他各种蛋白在免疫原性方面都发挥着显著作用，因此其研究前景、应用前景都十分明朗。
在对免疫反应进行诱发之后发现，布鲁氏菌新型疫苗尚未达到强大标准，还需要更多专业人士参与研发和探索，通过对免疫反应进行有效激发，从而不断提升其免疫保护功效。
参考文献
[1]易新萍.流产布鲁氏菌疫苗A19-ΔVirB12变株生物学特性研究[J].中国人兽共患病学报，2013，29（09）：836-840.
[2]王真.流产布鲁氏菌疫苗候选株RB6生物学特性研究[J].中国畜牧兽医，2012，39（04）：174-177.
[3]王晶妍.抗菌药物对布鲁氏菌体外最低抑菌浓度研究[J].河南师范大学学报（自然科学版），2013，41（02）：136-138.