猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因(OMP-1)的克隆、表达及其ELISA方法的建立

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猪传染性胸膜肺炎由猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起,是猪最重要的呼吸道传染病之一.通过筛选APP 3~8 kb随机基因组文库,获得1株阳性克隆.测序拯救质粒得到其DNA序列,通过BLAST分析确定此片段为APP外膜蛋白基因,预计成熟蛋白质的分子量为48.766 kD.根据序列设计特异性引物,用PCR扩增该基因,分子克隆表达该外膜蛋白.Western blot结果表明,该蛋白与APP康复期血清发生反应.纯化该重组蛋白,并将其作为抗原包被ELISA酶标板,对已知阳性血清、阴性血清和临床送检血清样品进行ELISA检测,为最终建立APPELISA检测方法奠定了基础.
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