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[摘要] 目的 研究胆红素对缺氧窒息致心肌损伤时心肌组织SOD、MDA变化影响。 方法 将实验动物随机分为3组，每组8只。对照组做颈部正中切口，暴露双侧颈总动脉。模型组建立脑缺氧缺血再灌注损伤模型后给予NS腹腔注射、胆红素组建立模型后给予胆红素10 mg/kg腹腔注射。各组大鼠分别于术后6 h处死。取心肌组织测SOD活性及MDA含量。 结果 胆红素组与模型组比较，心肌SOD活性明显增高（P<0.05） ，MDA含量明显下降（P<0.05），对照组与模型组比较，心肌SOD活性明显升高（P<0.05），MDA含量明显下降（P<0.05）。 结论 新生鼠缺氧缺血性心肌损伤时胆红素具有一定的保护作用，其机制可能是胆红素清除大量氧自由基，减轻自由基对心肌损伤。
[关键词] 胆红素；缺氧缺血；心肌损伤；超氧化物歧化酶；丙二醛
[中图分类号] R—332???[文献标识码] A???[文章编号] 2095—0616（2012）17—40—02
新生儿窒息是以脑损伤、心脏损伤等为主的多脏器损害性疾病，病情重，病死率高。近年来，国内外大量的研究表明，胆红素可有效抑制各种活性氧的产生及脂质过氧化。在氧化应激时发挥对心血管系统的保护作用[1]。为此选用7日龄SD乳鼠，建立HIR模型作为窒息程度的标准，用胆红素干预缺氧缺血致心肌损伤时的乳鼠，检测心肌超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）变化，探讨缺氧缺血性脑损伤时的心肌损伤并观察胆红素在其中的保护作用，并期望能以此提供临床依据。
1?材料与方法
1.1?一般材料
实验动物由昆明医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK（渝）20020001，选用健康SD大鼠，雌雄不限，7日龄，12～15 g，SOD活力、MDA含量及考马斯亮兰总蛋白试剂盒均购于南京建成试剂公司。CYS—1测氧仪由上海嘉定学联仪器厂生产。微型动脉夹由上海手术器械厂生产。
1.2?动物模型
参照张国庆等[2]动物模型的制作方法。SD大鼠（7 d龄），称重后编号，乙醚麻醉，取仰卧位固定，消毒皮肤后颈部正中切口，分离双侧颈总动脉，用微型动脉夹夹闭双侧颈总动脉，消毒纱布覆盖切口。将实验动物置于缺氧箱（8%氧浓度）中，1 h后松开动脉夹后再次放回箱内，缺氧2 h后取出，丝线（6—0号）缝合切口，备用。
1.3?实验分组
选实验动物24只，随机分为3组：对照组取颈部正中切口后暴露颈总动脉，不建立脑缺氧缺血再灌注损伤模型；模型组为建立模型后向实验动物腹腔注射生理盐水（生理盐水剂量同胆红素组胆红素的剂量）；胆红素组为模型建立后即刻给予实验动物腹腔注射胆红素10 mg/kg；各组实验动物于术后6 h处死。
1.4?取材和标本制作
解剖实验动物后快速取心肌组织块，匀浆，低温离心，取上清，保存于—80℃超低温冰箱中，备用。
1.5?指标检测
取心肌组织，匀浆后测SOD活性及MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定心肌组织SOD活性用，硫代巴比妥酸法测定MDA含量。SOD活力、MDA含量及考马斯亮兰总蛋白方法严格按试剂盒说明书操作，采用波长分别为550、532、539 nm处比色，比色杯光径为1 cm，测定采用岛津紫外可见分光光度仪。
1.6?统计学处理
采用SPSS13.0软件包进行，数据以（）表示，两组之间采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2?结果
对照组、胆红素组与模型组相比，模型组心肌组织SOD活性水平明显下降，MDA含量明显升高，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）；胆红素组与模型组比较，胆红素组心肌组织中SOD活性升高，MDA含量下降，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。3?讨论
新生儿窒息时，缺氧窒息后血液重新分布，以保证脑、心等重要器官的血供[3]。窒息致缺氧缺血性心肌損伤机理：若缺氧时间的持续延长及程度的继续加重，肺循环阻力增高，右心室后负荷增加，耗氧量增加，加重心内膜下心肌和左室壁的心肌缺血[4]。抢救复苏时吸氧，复氧致心肌组织发生再灌注损伤，产生大量氧自由基[5]。大量氧自由基使细胞膜的不饱合脂肪酸发生过氧化而损伤细胞膜；O2—、H2O2与DNA链中糖磷酸盐反应，使DNA发生断裂而破坏DNA的结构；氧自由基与蛋白分子中的甲硫氨酸、半胱氨酸等残基直接发生反应破坏蛋白质的一级结构[6]，故而损伤心肌细胞。本研究显示，对照组与模型组比较，模型组SOD活性显著下降，而MDA含量明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。说明窒息致心肌损伤时产生大量氧自由基，消耗较多超氧化物歧化酶，并产生大量脂质过氧化产物丙二醛。
胆红素是血红蛋白的代谢产物，多年来一直被认为是人体的排泄物， 近年的研究表明它是内源性抗氧化剂，能有效清除氧自由基，防止氧自由基对组织产生损伤作用。研究证实胆红素为生理性抗氧化剂，可能与胆红素的分子结构有关，其分子结构中白蛋白的不对称性使胆红素C10上的氢转化为活性氢原子，而与超氧阴离子等自由基结合更容易，进而使氧自由基清除等有关[1]。本研究证实，胆红素组与模型组比较，胆红素组心肌组织SOD活性显著高于模型组MDA含量低于模型组，说明胆红素具有清除自由基的作用。
综上所述，窒息新生SD大鼠心肌损伤时，胆红素使心肌组织中SOD的活性升高，MDA含量下降，提示在新生大鼠窒息心肌损伤时胆红素具有清除心肌组织产生的氧自由基，提高心肌组织抗氧自由基的能力。
[参考文献]
[1] 杨俊娟，程宇彤，张钧华.胆红素和氧自由基与心血管疾病的关系[J].中国动脉硬化杂志，2006，14（8）：728—730.
[2] 张国庆，陈惠金，蒋明华，等.新生大鼠脑缺氧缺血再灌注损伤模型的建立[J].上海实验动物科学，2003，23（1）：39—42.
[3]沈晓明，王卫平.儿科学[M].第7版.北京：人民卫生出版社，2008：98.
[4]金汉珍，黄德珉，宫希吉.实用新生儿学[M].北京：人民卫生出版社，2003：408.
[5] 金惠铭，王建枝.病理生理学[M].第7版.北京：人民卫生出版社，2008：209—212.
[6] 何平等.三七总皂甙对新生鼠脑缺氧缺血再灌注损伤时心肌抗氧化系统的影响[J].中国妇幼杂志 ，2010，21（4）：104—105.
（收稿日期：2012—04—23）
[关键词] 胆红素；缺氧缺血；心肌损伤；超氧化物歧化酶；丙二醛
[中图分类号] R—332???[文献标识码] A???[文章编号] 2095—0616（2012）17—40—02
新生儿窒息是以脑损伤、心脏损伤等为主的多脏器损害性疾病，病情重，病死率高。近年来，国内外大量的研究表明，胆红素可有效抑制各种活性氧的产生及脂质过氧化。在氧化应激时发挥对心血管系统的保护作用[1]。为此选用7日龄SD乳鼠，建立HIR模型作为窒息程度的标准，用胆红素干预缺氧缺血致心肌损伤时的乳鼠，检测心肌超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）变化，探讨缺氧缺血性脑损伤时的心肌损伤并观察胆红素在其中的保护作用，并期望能以此提供临床依据。
1?材料与方法
1.1?一般材料
实验动物由昆明医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK（渝）20020001，选用健康SD大鼠，雌雄不限，7日龄，12～15 g，SOD活力、MDA含量及考马斯亮兰总蛋白试剂盒均购于南京建成试剂公司。CYS—1测氧仪由上海嘉定学联仪器厂生产。微型动脉夹由上海手术器械厂生产。
1.2?动物模型
参照张国庆等[2]动物模型的制作方法。SD大鼠（7 d龄），称重后编号，乙醚麻醉，取仰卧位固定，消毒皮肤后颈部正中切口，分离双侧颈总动脉，用微型动脉夹夹闭双侧颈总动脉，消毒纱布覆盖切口。将实验动物置于缺氧箱（8%氧浓度）中，1 h后松开动脉夹后再次放回箱内，缺氧2 h后取出，丝线（6—0号）缝合切口，备用。
1.3?实验分组
选实验动物24只，随机分为3组：对照组取颈部正中切口后暴露颈总动脉，不建立脑缺氧缺血再灌注损伤模型；模型组为建立模型后向实验动物腹腔注射生理盐水（生理盐水剂量同胆红素组胆红素的剂量）；胆红素组为模型建立后即刻给予实验动物腹腔注射胆红素10 mg/kg；各组实验动物于术后6 h处死。
1.4?取材和标本制作
解剖实验动物后快速取心肌组织块，匀浆，低温离心，取上清，保存于—80℃超低温冰箱中，备用。
1.5?指标检测
取心肌组织，匀浆后测SOD活性及MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定心肌组织SOD活性用，硫代巴比妥酸法测定MDA含量。SOD活力、MDA含量及考马斯亮兰总蛋白方法严格按试剂盒说明书操作，采用波长分别为550、532、539 nm处比色，比色杯光径为1 cm，测定采用岛津紫外可见分光光度仪。
1.6?统计学处理
采用SPSS13.0软件包进行，数据以（）表示，两组之间采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2?结果
对照组、胆红素组与模型组相比，模型组心肌组织SOD活性水平明显下降，MDA含量明显升高，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）；胆红素组与模型组比较，胆红素组心肌组织中SOD活性升高，MDA含量下降，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。3?讨论
新生儿窒息时，缺氧窒息后血液重新分布，以保证脑、心等重要器官的血供[3]。窒息致缺氧缺血性心肌損伤机理：若缺氧时间的持续延长及程度的继续加重，肺循环阻力增高，右心室后负荷增加，耗氧量增加，加重心内膜下心肌和左室壁的心肌缺血[4]。抢救复苏时吸氧，复氧致心肌组织发生再灌注损伤，产生大量氧自由基[5]。大量氧自由基使细胞膜的不饱合脂肪酸发生过氧化而损伤细胞膜；O2—、H2O2与DNA链中糖磷酸盐反应，使DNA发生断裂而破坏DNA的结构；氧自由基与蛋白分子中的甲硫氨酸、半胱氨酸等残基直接发生反应破坏蛋白质的一级结构[6]，故而损伤心肌细胞。本研究显示，对照组与模型组比较，模型组SOD活性显著下降，而MDA含量明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。说明窒息致心肌损伤时产生大量氧自由基，消耗较多超氧化物歧化酶，并产生大量脂质过氧化产物丙二醛。
胆红素是血红蛋白的代谢产物，多年来一直被认为是人体的排泄物， 近年的研究表明它是内源性抗氧化剂，能有效清除氧自由基，防止氧自由基对组织产生损伤作用。研究证实胆红素为生理性抗氧化剂，可能与胆红素的分子结构有关，其分子结构中白蛋白的不对称性使胆红素C10上的氢转化为活性氢原子，而与超氧阴离子等自由基结合更容易，进而使氧自由基清除等有关[1]。本研究证实，胆红素组与模型组比较，胆红素组心肌组织SOD活性显著高于模型组MDA含量低于模型组，说明胆红素具有清除自由基的作用。
综上所述，窒息新生SD大鼠心肌损伤时，胆红素使心肌组织中SOD的活性升高，MDA含量下降，提示在新生大鼠窒息心肌损伤时胆红素具有清除心肌组织产生的氧自由基，提高心肌组织抗氧自由基的能力。
[参考文献]
[1] 杨俊娟，程宇彤，张钧华.胆红素和氧自由基与心血管疾病的关系[J].中国动脉硬化杂志，2006，14（8）：728—730.
[2] 张国庆，陈惠金，蒋明华，等.新生大鼠脑缺氧缺血再灌注损伤模型的建立[J].上海实验动物科学，2003，23（1）：39—42.
[3]沈晓明，王卫平.儿科学[M].第7版.北京：人民卫生出版社，2008：98.
[4]金汉珍，黄德珉，宫希吉.实用新生儿学[M].北京：人民卫生出版社，2003：408.
[5] 金惠铭，王建枝.病理生理学[M].第7版.北京：人民卫生出版社，2008：209—212.
[6] 何平等.三七总皂甙对新生鼠脑缺氧缺血再灌注损伤时心肌抗氧化系统的影响[J].中国妇幼杂志 ，2010，21（4）：104—105.
（收稿日期：2012—04—23）