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【摘要】目的对采取LC-MS/MS法测定分析动物源性食品中吡喹酮残留的效果进行分析探讨，为今后的应用工作提供可靠的参考依据。方法采取乙酸乙酯对样品中的吡喹酮残留进行提取，经LC-MS/MS法进行测定，计算回收率和RSD。结果本次试验中发现在10-40ug/kg范围内回收率在92.3%-110.0%之间。结论采取LC-MS/MS法能够对动物源性食品中吡喹酮的残留进行准确的测定与分析，然吡喹酮残留物的提取条件以及流动相等因素会对LC-MS/MS测定产生一定程度的影响，在今后的检测过程中应给予关注。
【关键词】LC-MS/MS；动物源性食品；吡喹酮残留；固相萃取；准三级质谱
吡喹酮属于一种广谱的抗寄生虫药物，其能够对各种肺吸虫、血吸虫以及姜片虫产生较强的杀灭效果，在动物以及水生动物养殖中应用相对广泛，有时在人体用药中也有应用。近几年有研究证实吡喹酮在治疗过程中易发生诸多的不良反应，尤其是会影响到心脏功能，因而引起了人们的重视[1]。本次研究中出于对LC-MS/MS法对动物源性食品中吡喹酮的殘留进行了测定与分析，现汇报如下。
1仪器与试剂
1.1实验仪器本次试验中所应用的仪器包括：Agilent1100液相色谱仪，ABI/SCIEX API3000MS-MS液质联用仪（配置电喷雾离子源ESI）。
1.2实验试剂研究中所用试剂包括：甲醇、乙腈（均为色谱纯），水为超纯水，其余试剂为分析纯；吡喹酮（含量不少于98%）；碱性氧化铝小柱：1g/6mL。
2方法
2.1色谱与质谱条件液相色谱条件：色谱柱为IntersilC8-3柱，规格为：5um，150mm×2.1mm（内径）；柱温为：40℃；流动相为：乙腈-0.1%乙酸（4：6）；流速控制在：0.30mL/min；进样量为：10ul。
质谱条件：雾化气（NEB）12.0，辅助加热气7.0L/min，气帘气（CUR）8.0，碰撞气（CAD）8.0，上述所有气体均采用氮气。去簇电压（DP）为70V；电喷雾离子源的喷雾电压（IS）为4500V；辅助加热气温度（TEM）控制在500℃，碰撞能量为23V（m/z313/203），40V（m/z313/83）。Q1和Q3均作为单位分辨率。检测方式采取多反应选择监测（MRM）模式，正离子。监测离子为：m/z313/203（定量离子对），313/83[2]。
2.2样品处理将试样进行粉碎，称取2g，放置在50ml的离心试管中，而后在试管中加入乙酸乙酯，并在匀浆机上在9500r/min的条件下均质30s，而后在4000r/min的条件下进行离心操作5min，共提取2次，合并提取液后取上清液，转移至比色管中，采用乙酸乙酯进行定容，而后摇匀备用。准确移取上述样品试液5.00ml至于蒸发皿中，在40℃的条件下进行蒸发，而后采取甲醇溶液进行溶解，转移至碱性氧化铝净化柱上，经2ml的甲醇溶液进行洗涤，对全部流出液均进行收集，而后在40℃条件下真空蒸干，最后采取乙腈溶液将残渣进行溶解，经超声在水浴中震荡，加水1.00ml，混匀，在0.2um的滤膜上过滤，精取10ul进样检测。
3结果
3.1线性响应范围采取上述色谱和质谱条件，取一系列浓度的吡喹酮标准品进行检测，而后将仪器响应峰面积Y对吡喹酮浓度X展开线性回归，最后得知，在吡喹酮浓度在2-50ug/l的范围内具有良好的线性关系，最终得线性回归方程为Y=4.09×104X-2.45×104，r=0.9998。
3.2回收率与重复性本次实验中分别对猪肌肉、猪肝脏以及鳗鱼肉的样品进行检测，并展开了3个水平的回收实验，结果详见表1。
4讨论
吡喹酮属于一种弱极性化合物，因此在采取ESA离子化方式时电离存在一定困难，若是流动相含水量相对较低，则会导致其离子化不稳定，最终导致定量结果的不准确。本次试验中发现，流动相中0.1%的乙酸乙酯溶液比例在60%时能够实现吡喹酮的稳定电离，因此最后本次试验确定流动相为：乙腈-0.1%乙酸（4：6）[3]。动物源性食品的脂肪含量相对较高，因此在去除样品提取液中的脂肪时需要对净化步骤引起重视。吡喹酮的极性较弱，因此在采取液液萃取的方式会引起脂肪去除不彻底，并会造成较大损失，因此本次试验考虑了采取固液萃取形式，经碱性氧化铝固相柱净化，可以得到较大的回收率[4]。
综上所述，在采取LC-MS/MS法对动物源性食品中吡喹酮的残留进行测定时可以得到较大的回收率，且精密度良好，然应注意流动相的选择和样品脂肪的处理，否则会对检测结果产生一定程度的影响。
参考文献
[1]苏日娜，斯琴.吡喹酮治疗囊尾蚴病的疗效及毒副作用的临床分析[J]。中国寄生虫与寄生虫病杂志，2009，20（05）：320-322.
[2]吴晓苹，王玲，施点望，等.固相萃取-高效液相色谱法测定鱼组织中的吡喹酮和克螨特残留[J].色谱，2009，23（04）：434-435.
[3]林峰，林海丹，吴映璇，等.动物源性食品中吡喹酮残留量的LCMS/MS测定[J].分析测试学报，2010，26（05）：621-622.
[4]王蓓，商军，华贤辉，等.高效液相色谱法测定赛鸽用复方吡喹酮胶囊中吡喹酮和伊维菌素的含量[J].中国兽药杂志，2010，39（09）：161-162.
【关键词】LC-MS/MS；动物源性食品；吡喹酮残留；固相萃取；准三级质谱
吡喹酮属于一种广谱的抗寄生虫药物，其能够对各种肺吸虫、血吸虫以及姜片虫产生较强的杀灭效果，在动物以及水生动物养殖中应用相对广泛，有时在人体用药中也有应用。近几年有研究证实吡喹酮在治疗过程中易发生诸多的不良反应，尤其是会影响到心脏功能，因而引起了人们的重视[1]。本次研究中出于对LC-MS/MS法对动物源性食品中吡喹酮的殘留进行了测定与分析，现汇报如下。
1仪器与试剂
1.1实验仪器本次试验中所应用的仪器包括：Agilent1100液相色谱仪，ABI/SCIEX API3000MS-MS液质联用仪（配置电喷雾离子源ESI）。
1.2实验试剂研究中所用试剂包括：甲醇、乙腈（均为色谱纯），水为超纯水，其余试剂为分析纯；吡喹酮（含量不少于98%）；碱性氧化铝小柱：1g/6mL。
2方法
2.1色谱与质谱条件液相色谱条件：色谱柱为IntersilC8-3柱，规格为：5um，150mm×2.1mm（内径）；柱温为：40℃；流动相为：乙腈-0.1%乙酸（4：6）；流速控制在：0.30mL/min；进样量为：10ul。
质谱条件：雾化气（NEB）12.0，辅助加热气7.0L/min，气帘气（CUR）8.0，碰撞气（CAD）8.0，上述所有气体均采用氮气。去簇电压（DP）为70V；电喷雾离子源的喷雾电压（IS）为4500V；辅助加热气温度（TEM）控制在500℃，碰撞能量为23V（m/z313/203），40V（m/z313/83）。Q1和Q3均作为单位分辨率。检测方式采取多反应选择监测（MRM）模式，正离子。监测离子为：m/z313/203（定量离子对），313/83[2]。
2.2样品处理将试样进行粉碎，称取2g，放置在50ml的离心试管中，而后在试管中加入乙酸乙酯，并在匀浆机上在9500r/min的条件下均质30s，而后在4000r/min的条件下进行离心操作5min，共提取2次，合并提取液后取上清液，转移至比色管中，采用乙酸乙酯进行定容，而后摇匀备用。准确移取上述样品试液5.00ml至于蒸发皿中，在40℃的条件下进行蒸发，而后采取甲醇溶液进行溶解，转移至碱性氧化铝净化柱上，经2ml的甲醇溶液进行洗涤，对全部流出液均进行收集，而后在40℃条件下真空蒸干，最后采取乙腈溶液将残渣进行溶解，经超声在水浴中震荡，加水1.00ml，混匀，在0.2um的滤膜上过滤，精取10ul进样检测。
3结果
3.1线性响应范围采取上述色谱和质谱条件，取一系列浓度的吡喹酮标准品进行检测，而后将仪器响应峰面积Y对吡喹酮浓度X展开线性回归，最后得知，在吡喹酮浓度在2-50ug/l的范围内具有良好的线性关系，最终得线性回归方程为Y=4.09×104X-2.45×104，r=0.9998。
3.2回收率与重复性本次实验中分别对猪肌肉、猪肝脏以及鳗鱼肉的样品进行检测，并展开了3个水平的回收实验，结果详见表1。
4讨论
吡喹酮属于一种弱极性化合物，因此在采取ESA离子化方式时电离存在一定困难，若是流动相含水量相对较低，则会导致其离子化不稳定，最终导致定量结果的不准确。本次试验中发现，流动相中0.1%的乙酸乙酯溶液比例在60%时能够实现吡喹酮的稳定电离，因此最后本次试验确定流动相为：乙腈-0.1%乙酸（4：6）[3]。动物源性食品的脂肪含量相对较高，因此在去除样品提取液中的脂肪时需要对净化步骤引起重视。吡喹酮的极性较弱，因此在采取液液萃取的方式会引起脂肪去除不彻底，并会造成较大损失，因此本次试验考虑了采取固液萃取形式，经碱性氧化铝固相柱净化，可以得到较大的回收率[4]。
综上所述，在采取LC-MS/MS法对动物源性食品中吡喹酮的残留进行测定时可以得到较大的回收率，且精密度良好，然应注意流动相的选择和样品脂肪的处理，否则会对检测结果产生一定程度的影响。
参考文献
[1]苏日娜，斯琴.吡喹酮治疗囊尾蚴病的疗效及毒副作用的临床分析[J]。中国寄生虫与寄生虫病杂志，2009，20（05）：320-322.
[2]吴晓苹，王玲，施点望，等.固相萃取-高效液相色谱法测定鱼组织中的吡喹酮和克螨特残留[J].色谱，2009，23（04）：434-435.
[3]林峰，林海丹，吴映璇，等.动物源性食品中吡喹酮残留量的LCMS/MS测定[J].分析测试学报，2010，26（05）：621-622.
[4]王蓓，商军，华贤辉，等.高效液相色谱法测定赛鸽用复方吡喹酮胶囊中吡喹酮和伊维菌素的含量[J].中国兽药杂志，2010，39（09）：161-162.