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为了解决在生物芯片图像网格化过程中网格线冗余、缺失及出现在信号点上的现象，提出一种结合最大内间距（Otsu）和改进了网格校准方法的网格定位算法。首先将调整后的最大内间距作为最佳阈值得到生物芯片图像的二值参考图像，确定初始网格线；其次对初始网格线进行测试、校准；最后获得优化后的网格线，得到网格化图像。实验结果表明，改进后算法的网格线准确率高于其它算法。改进后算法简单实用，能实现生物芯片图像网格化功能，可大大减小后续图像分析、处理的复杂程度。