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目的
制备Y盒结合蛋白1磷酸化抗体(pAb/YB-1S102);探讨腹水中磷酸化YB-1(pYB-1)作为标志物辅助诊断原发性肝癌合并肺转移的临床价值。
方法通过生物信息学预测并化学合成102位丝氨酸磷酸化YB-1多肽,耦联载体蛋白后免疫家兔;protein A亲和层析法纯化抗血清pAb/YB-1S102,并验证其特异性。收集109例患者腹水并富集腹水中pYB-1,其中原发性肝细胞癌(HCC)36例,HCC合并肺转移44例,肝硬化29例;采用Western blot定性检测腹水中pYB-1,并对定性结果进行回归判别与受试者工作特征(ROC)曲线分析。计数资料采用χ2检验。
结果酶联免疫吸附法与十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示制备的pAb/YB-1S102效价≥1∶1×106,且纯度较高。Western blot结果证实pAb/YB-1S102能特异性识别内源性pYB-1S102。肝硬化患者腹水中未检出pYB-1S102,HCC合并肺转移患者腹水pYB-1S102阳性率(77.3%)显著高于HCC(30.6%,χ2 = 11.69,P<0.01);回归分析与ROC曲线结果表明pYB-1S102辅助诊断HCC合并肺转移的灵敏度为77.3%,符合率为73.8%(χ2 = 17.56,P<0.01)。
结论成功制备可识别内源性pYB-1的抗体pAb/YB-1S102;通过定性检测腹水pYB-1,可鉴别诊断HCC合并肺转移。