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[摘要]文章采用TLC法对处方中的三七进行了定性鉴别，
[关键词] 田七 成分测定
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：
田七颗粒主要以三七为原料加工制成，具有活血定痛、祛瘀生新的作用。三七主要含人参皂苷Rb1、Rg1、Re和三七皂苷R1等20余种皂苷成分，其中人参皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷R1是含量最高的3个成分，三七皂苷R1又是三七的特征性成分。本试验对制剂的质量标准进行了研究，用TLC法对处方中的三七进行了定性鉴别，并采用HPLC法测定田七颗粒中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量，方法简便，准确，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。
一、仪器与试药
Agilent1100系列高效液相色谱仪：G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1379A脱气机，G1314VWD检测器，Agilent1100化学工作站；UV-2201型紫外-可见分光光度仪。
田七颗粒，广西玉林制药有限责任公司生产；人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品（供含量测定用，批号：人参皂苷Rg1为0703-9914、0703-9813，三七皂苷R1为0745-200109），均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
二、 定性鉴别
取本品2 g，研细，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺三七的阴性对照品2 g，同法制成阴性对照品溶液。再取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷 R1对照品，分别加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与人参皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品相应的位置上，显红色的斑点，而阴性对照液无相应斑点。
三、含量测定
1、 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（18∶82）；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按三七皂苷R1计算应不低于3 000。
2、 对照品溶液的制备
分别精密称取人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg1 0.396 mg和三七皂苷R1 0.092 mg的混合溶液，摇匀，即得。
3、 供试品溶液的制备
取本品适量，研细，取约1.2 g，精密称定，加水适量使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇萃取液，加氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去氨试液，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇溶解并移入10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。
4、 空白试验
按处方及制备工艺制备不含三七药材的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备并测定。按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别注入色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照在此保留时间无干扰。因此，可在此系统条件下对人参皂苷Rg1和三七皂苷R1进行定量分析。
5？、 线性关系的考察？
精密称取人参皂苷Rg1对照品31.4 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为人参皂苷Rg1对照品贮备液（0.628 mg/mL）。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.062 8、0.188 4、0.314 0、0.439 6、0.565 2 mg/mL的溶液。分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以人参皂苷Rg1对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=209.713X-0.260，r=0.999 8，人参皂苷Rg1在0.628～5.652 μg范围内呈良好的线性关系。
精密称取三七皂苷R1对照品7.75 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为三七皂苷R1对照品贮备液（0.155 mg/mL）。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.015 5、0.046 5、0.077 5、0.108 5、0.139 5 mg/mL的溶液。分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以三七皂苷R1对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=208.065X-2.85，r=0.999 8，三七皂苷R1在0.155～1.395 μg范围内呈良好的线性关系。
6、 精密度试验
取对照品溶液，重复进样6次，测定峰面积，人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分别为0.56%和0.69%，表明精密度良好。
7、 重复性试验
取同一批号（030102）的田七颗粒，共6份，按“3.3”项制备，进样，测定峰面积，人参皂苷Rg1平均含量为3.708 mg/g， RSD=1.01%；三七皂苷R1平均含量为0.698 mg/g，RSD=0.92%。
8、 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液，分别于制备后12 h内每隔2 h进样1次，测定峰面积，人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分别为1.52%和1.47%，表明样品溶液在12 h基本稳定。
9、 加样回收率测定
取已知含量的样品（人参皂苷Rg1含量3.708 mg/g和三七皂苷R1含量0.698 mg/g）6份，精密称定，分别精密加入人参皂苷Rg1对照品贮备液4.5 mL和三七皂苷R1对照品贮备液3.5 mL，挥干甲醇后，按供试品溶液的制备方法制备，根据上面色谱条件测定峰面积，计算回收率， 10、？ 样品测定
分别精密吸取10 μL对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件，注入色谱仪，测定，
四、讨论
在定性鉴别项下，曾选用氯仿-甲醇-水（65∶35∶10） 10 ℃以下的下层液作为展开剂，但其相对湿度应控制在50%左右，湿度过高容易使斑点变形移位，所以选用了本试验的正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）的上层溶液为展开剂。在含量测定项下，供试品溶液制备中还比较了另外的提取方法：乙醚脱脂和超声提取，结果比本文的含量稍低，所以选择了本试验的提取方法。参考文献，采用乙腈-0.05%磷酸溶液（23∶77），人参皂苷Rg1与三七皂苷R1分离好，但人参皂苷Rg1与其右侧干扰峰分不开，调整乙腈-0.05%磷酸溶液比例为（18∶82）时，人参皂苷Rg1峰形好，跟干扰峰能达到很好的分离效果。
[关键词] 田七 成分测定
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：
田七颗粒主要以三七为原料加工制成，具有活血定痛、祛瘀生新的作用。三七主要含人参皂苷Rb1、Rg1、Re和三七皂苷R1等20余种皂苷成分，其中人参皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷R1是含量最高的3个成分，三七皂苷R1又是三七的特征性成分。本试验对制剂的质量标准进行了研究，用TLC法对处方中的三七进行了定性鉴别，并采用HPLC法测定田七颗粒中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量，方法简便，准确，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。
一、仪器与试药
Agilent1100系列高效液相色谱仪：G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1379A脱气机，G1314VWD检测器，Agilent1100化学工作站；UV-2201型紫外-可见分光光度仪。
田七颗粒，广西玉林制药有限责任公司生产；人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品（供含量测定用，批号：人参皂苷Rg1为0703-9914、0703-9813，三七皂苷R1为0745-200109），均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
二、 定性鉴别
取本品2 g，研细，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺三七的阴性对照品2 g，同法制成阴性对照品溶液。再取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷 R1对照品，分别加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与人参皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品相应的位置上，显红色的斑点，而阴性对照液无相应斑点。
三、含量测定
1、 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（18∶82）；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按三七皂苷R1计算应不低于3 000。
2、 对照品溶液的制备
分别精密称取人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg1 0.396 mg和三七皂苷R1 0.092 mg的混合溶液，摇匀，即得。
3、 供试品溶液的制备
取本品适量，研细，取约1.2 g，精密称定，加水适量使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇萃取液，加氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去氨试液，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇溶解并移入10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。
4、 空白试验
按处方及制备工艺制备不含三七药材的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备并测定。按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别注入色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照在此保留时间无干扰。因此，可在此系统条件下对人参皂苷Rg1和三七皂苷R1进行定量分析。
5？、 线性关系的考察？
精密称取人参皂苷Rg1对照品31.4 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为人参皂苷Rg1对照品贮备液（0.628 mg/mL）。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.062 8、0.188 4、0.314 0、0.439 6、0.565 2 mg/mL的溶液。分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以人参皂苷Rg1对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=209.713X-0.260，r=0.999 8，人参皂苷Rg1在0.628～5.652 μg范围内呈良好的线性关系。
精密称取三七皂苷R1对照品7.75 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为三七皂苷R1对照品贮备液（0.155 mg/mL）。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.015 5、0.046 5、0.077 5、0.108 5、0.139 5 mg/mL的溶液。分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以三七皂苷R1对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=208.065X-2.85，r=0.999 8，三七皂苷R1在0.155～1.395 μg范围内呈良好的线性关系。
6、 精密度试验
取对照品溶液，重复进样6次，测定峰面积，人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分别为0.56%和0.69%，表明精密度良好。
7、 重复性试验
取同一批号（030102）的田七颗粒，共6份，按“3.3”项制备，进样，测定峰面积，人参皂苷Rg1平均含量为3.708 mg/g， RSD=1.01%；三七皂苷R1平均含量为0.698 mg/g，RSD=0.92%。
8、 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液，分别于制备后12 h内每隔2 h进样1次，测定峰面积，人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分别为1.52%和1.47%，表明样品溶液在12 h基本稳定。
9、 加样回收率测定
取已知含量的样品（人参皂苷Rg1含量3.708 mg/g和三七皂苷R1含量0.698 mg/g）6份，精密称定，分别精密加入人参皂苷Rg1对照品贮备液4.5 mL和三七皂苷R1对照品贮备液3.5 mL，挥干甲醇后，按供试品溶液的制备方法制备，根据上面色谱条件测定峰面积，计算回收率， 10、？ 样品测定
分别精密吸取10 μL对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件，注入色谱仪，测定，
四、讨论
在定性鉴别项下，曾选用氯仿-甲醇-水（65∶35∶10） 10 ℃以下的下层液作为展开剂，但其相对湿度应控制在50%左右，湿度过高容易使斑点变形移位，所以选用了本试验的正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）的上层溶液为展开剂。在含量测定项下，供试品溶液制备中还比较了另外的提取方法：乙醚脱脂和超声提取，结果比本文的含量稍低，所以选择了本试验的提取方法。参考文献，采用乙腈-0.05%磷酸溶液（23∶77），人参皂苷Rg1与三七皂苷R1分离好，但人参皂苷Rg1与其右侧干扰峰分不开，调整乙腈-0.05%磷酸溶液比例为（18∶82）时，人参皂苷Rg1峰形好，跟干扰峰能达到很好的分离效果。