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【摘要】目的：研究在大鼠肺纤维化形成的过程中，雷帕霉素的影响作用和机制。方法：选取15只大鼠，将其随机分为对照组（5只）、观察1组（5只）、观察2组（5只）。对照组使用气管注入生理盐水，观察组首先使用气管注入博来霉素，3天后对观察2组的大鼠使用雷帕霉素进行灌胃处理，时间持续10天。最后对大鼠的肺组织进行切片染色，使用化学方法检测TGF-β的表达。结果：观察2组中大鼠的肺纤维化程度明显轻于观察1组，Ashcroft评分高于观察1组，低于对照组；观察2组中大鼠的TGF-β1表达高于对照组，低于观察1组，P＜0.05，具有统计学意义。结论：对于大鼠肺纤维化的形成，雷帕霉素具有明显的抑制作用。
【关键词】大鼠；肺纤维化；雷帕霉素；博来霉素
【中图分类号】R-0【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）08-0381-01
肺纤维化是肺间质性疾病的一种类型，典型的特征是在肺间质上，沉积着大量的细胞外基质蛋白。相关研究发现，致使出现这一症状的原因在于，被免疫细胞和炎症细胞激活的细胞因子和生长因子诱导纤维细胞增殖，从而产生大量的胶原蛋白[1]。常规的治疗方案是使用环磷酰胺、糖皮质激素等进行免疫抑制，但是，这些药物的毒副作用强烈，治疗效果不佳。作为大环内酯药物的一种，雷帕霉素对于淋巴细胞和非淋巴细胞都有很高的抵抗增殖作用，能够抑制生长因子和细胞因子的细胞信号转换[2]。因此，雷帕霉素已经在肝纤维化的治疗中应用。本文对大鼠的肝纤维化采用雷帕霉素进行干预，取得了良好的效果。具体结果报告如下：
1.资料与方法
1.1基本资料15只大鼠体重在200g左右，体质健康，均为SPF级雌性大鼠。抗体TGFβ1来自于santa cruz公司；二抗抗体购于DAKO公司，货号为K5007；博来霉素由天津太和制药有限公司生产，规格每支4mg；雷帕霉素由上海源叶生物科技公司生产，货号为53123-88-9。
1.2操作方法将15只大鼠随机分为对照组（5只）、观察1组（5只）、观察2组（5只）。对照组使用气管注入生理盐水，剂量按照大鼠的体重进行控制，为每千克5mg。观察组首先使用气管注入博来霉素，从而对肺纤维化模型进行复制。3天后对观察2组的大鼠使用雷帕霉素进行灌胃处理，剂量为每天每千克1mg，将这一过程持续10天。28天之后配置浓度为6%的水合氯醛，对大鼠进行腹腔注射麻醉，剂量控制为每千克1mg。在大鼠的左侧肺下叶提取相同的肺组织，然后常规包埋，并且进行石蜡切片。取材结束后，对大鼠进行放血处死。
1.3肺组织切片染色和免疫组织检查石蜡切片的厚度控制在5μm，第一步使用苏木素染色液对细胞核进行3分钟的染色，完成后使用流水冲洗。第二步使用盐酸乙醇进行分化处理，完成后使用流水冲洗。第三步使用氨水着蓝色30秒，完成后用蒸馏水冲洗，在显微镜下观察染色情况。第四步使用酒精伊红染细胞质15秒，完成后用酒精进行脱水处理，并使用中性树胶封片。第五步，使用显微镜观察肺间质的厚度，观察肺纤维化的范围大小，并检测TGF-β1的肺组织表达。
1.4观察项目完成石蜡切片和染色以后，应用Ashcroft评分标准对肺纤维化程度进行评估。对染色完成的切片在显微镜下进行拍照取图，利用专业分析软件计算积分光密度，最后取平均值作为蛋白表达的强弱指标。
1.5统计学处理Ashcroft评分标准使用总体分布统计学方法进行分析，TGF-β1的积分光密度使用随机样本方差分析方法，组间对比使用LSD-t检验。P＜0.05，说明具有差异统计学意义。
2.结果
2.1在肺组织病理学变化上的比较 观察1组大鼠的肺泡结构遭破坏，小气道周围的炎性细胞产生明显浸润现象，并且形成纤维化。观察2组大鼠的炎性细胞也产生浸润现象，但比观察1组症状要轻，且没有形成纤维化。在Ashcroft评分上，观察2组的评分（2.91±0.58）明显高于观察1组（0.29±0.56），但低于对照组（5.78±1.66），对比差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2在TGF-β1表达情况上的比较观察2组TGF-β1的表达量（5521.00±1615.63）明显高于对照组（3368.00±1476.89），但小于观察1组（7778.00±1520.34）。三组TGF-β1表达水平差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。
3.讨论
3.1 TGF-β1TGF-β1在肺纤维化的形成和发展中起到关键作用，能够加快纤维细胞的增殖，使其向成肌纤维细胞转变。而成肌纤维细胞与细胞外基质蛋白的沉积有密切关联，在肺纤维的发病中作用十分重要[3]。在本次研究中，观察组中的大鼠TGF-β1的表达量都在增高，但应用雷帕霉素的一组TGF-β1表达量要比应用博来霉素的低。这就说明，雷帕霉素能够抑制TGF-β1的过度增殖，降低肺纤维化的发展速度。
3.2雷帕霉素雷帕霉素能够抑制多种T细胞的增殖发展，因此目前被广泛应用在免疫疾病和抗排斥反应的治疗中。相关研究表明，雷帕霉素还能够对纤维细胞产生作用。当下国内外的研究中，普遍使用雷帕霉素对肺纤维化的大鼠进行干预，从而得出雷帕霉素在抑制肺纤维化中的作用。至于雷帕霉素的抑制原因，主要是因为它能够和细胞受体FK506蛋白结合成复合物，这种复合物能够抑制蛋白激酶的活性，从而减弱磷酸化作用，阻断生物信号向下游传递[4]。这其中，就包含了TGF-β1因子。
综上，将雷帕霉素应用在肺纤维化的治疗上，TGF-β1的表达量明显降低，能够抑制TGF-β1的过度增殖，炎性细胞的浸润现象比较轻，且不会形成纤维化。因此，雷帕霉素对于肺纤维化具有明显的抑制作用。
参考文献：
[1]黄莺,徐芳,万勇,等. 雷帕霉素对肺间质纤维化大鼠IL-17、IL-2、TGF-β和IL-6及调节性T细胞的影响[J]. 安徽医药,2014,03（09）:423-427.
[2]熊伟,程金湘,章翔. 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白研究进展[J]. 中华神经外科疾病研究杂志,2011,01（13）:85-88.
[3]李进,邹祥. 雷帕霉素及其衍生物开发现状、作用机制及生物合成研究进展[J]. 中国抗生素杂志,2011,11（02）:806-813.
[4]穆云龙. 雷帕霉素研究进展[J]. 河北化工,2010,01（08）:21-23.
【关键词】大鼠；肺纤维化；雷帕霉素；博来霉素
【中图分类号】R-0【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）08-0381-01
肺纤维化是肺间质性疾病的一种类型，典型的特征是在肺间质上，沉积着大量的细胞外基质蛋白。相关研究发现，致使出现这一症状的原因在于，被免疫细胞和炎症细胞激活的细胞因子和生长因子诱导纤维细胞增殖，从而产生大量的胶原蛋白[1]。常规的治疗方案是使用环磷酰胺、糖皮质激素等进行免疫抑制，但是，这些药物的毒副作用强烈，治疗效果不佳。作为大环内酯药物的一种，雷帕霉素对于淋巴细胞和非淋巴细胞都有很高的抵抗增殖作用，能够抑制生长因子和细胞因子的细胞信号转换[2]。因此，雷帕霉素已经在肝纤维化的治疗中应用。本文对大鼠的肝纤维化采用雷帕霉素进行干预，取得了良好的效果。具体结果报告如下：
1.资料与方法
1.1基本资料15只大鼠体重在200g左右，体质健康，均为SPF级雌性大鼠。抗体TGFβ1来自于santa cruz公司；二抗抗体购于DAKO公司，货号为K5007；博来霉素由天津太和制药有限公司生产，规格每支4mg；雷帕霉素由上海源叶生物科技公司生产，货号为53123-88-9。
1.2操作方法将15只大鼠随机分为对照组（5只）、观察1组（5只）、观察2组（5只）。对照组使用气管注入生理盐水，剂量按照大鼠的体重进行控制，为每千克5mg。观察组首先使用气管注入博来霉素，从而对肺纤维化模型进行复制。3天后对观察2组的大鼠使用雷帕霉素进行灌胃处理，剂量为每天每千克1mg，将这一过程持续10天。28天之后配置浓度为6%的水合氯醛，对大鼠进行腹腔注射麻醉，剂量控制为每千克1mg。在大鼠的左侧肺下叶提取相同的肺组织，然后常规包埋，并且进行石蜡切片。取材结束后，对大鼠进行放血处死。
1.3肺组织切片染色和免疫组织检查石蜡切片的厚度控制在5μm，第一步使用苏木素染色液对细胞核进行3分钟的染色，完成后使用流水冲洗。第二步使用盐酸乙醇进行分化处理，完成后使用流水冲洗。第三步使用氨水着蓝色30秒，完成后用蒸馏水冲洗，在显微镜下观察染色情况。第四步使用酒精伊红染细胞质15秒，完成后用酒精进行脱水处理，并使用中性树胶封片。第五步，使用显微镜观察肺间质的厚度，观察肺纤维化的范围大小，并检测TGF-β1的肺组织表达。
1.4观察项目完成石蜡切片和染色以后，应用Ashcroft评分标准对肺纤维化程度进行评估。对染色完成的切片在显微镜下进行拍照取图，利用专业分析软件计算积分光密度，最后取平均值作为蛋白表达的强弱指标。
1.5统计学处理Ashcroft评分标准使用总体分布统计学方法进行分析，TGF-β1的积分光密度使用随机样本方差分析方法，组间对比使用LSD-t检验。P＜0.05，说明具有差异统计学意义。
2.结果
2.1在肺组织病理学变化上的比较 观察1组大鼠的肺泡结构遭破坏，小气道周围的炎性细胞产生明显浸润现象，并且形成纤维化。观察2组大鼠的炎性细胞也产生浸润现象，但比观察1组症状要轻，且没有形成纤维化。在Ashcroft评分上，观察2组的评分（2.91±0.58）明显高于观察1组（0.29±0.56），但低于对照组（5.78±1.66），对比差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2在TGF-β1表达情况上的比较观察2组TGF-β1的表达量（5521.00±1615.63）明显高于对照组（3368.00±1476.89），但小于观察1组（7778.00±1520.34）。三组TGF-β1表达水平差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）。
3.讨论
3.1 TGF-β1TGF-β1在肺纤维化的形成和发展中起到关键作用，能够加快纤维细胞的增殖，使其向成肌纤维细胞转变。而成肌纤维细胞与细胞外基质蛋白的沉积有密切关联，在肺纤维的发病中作用十分重要[3]。在本次研究中，观察组中的大鼠TGF-β1的表达量都在增高，但应用雷帕霉素的一组TGF-β1表达量要比应用博来霉素的低。这就说明，雷帕霉素能够抑制TGF-β1的过度增殖，降低肺纤维化的发展速度。
3.2雷帕霉素雷帕霉素能够抑制多种T细胞的增殖发展，因此目前被广泛应用在免疫疾病和抗排斥反应的治疗中。相关研究表明，雷帕霉素还能够对纤维细胞产生作用。当下国内外的研究中，普遍使用雷帕霉素对肺纤维化的大鼠进行干预，从而得出雷帕霉素在抑制肺纤维化中的作用。至于雷帕霉素的抑制原因，主要是因为它能够和细胞受体FK506蛋白结合成复合物，这种复合物能够抑制蛋白激酶的活性，从而减弱磷酸化作用，阻断生物信号向下游传递[4]。这其中，就包含了TGF-β1因子。
综上，将雷帕霉素应用在肺纤维化的治疗上，TGF-β1的表达量明显降低，能够抑制TGF-β1的过度增殖，炎性细胞的浸润现象比较轻，且不会形成纤维化。因此，雷帕霉素对于肺纤维化具有明显的抑制作用。
参考文献：
[1]黄莺,徐芳,万勇,等. 雷帕霉素对肺间质纤维化大鼠IL-17、IL-2、TGF-β和IL-6及调节性T细胞的影响[J]. 安徽医药,2014,03（09）:423-427.
[2]熊伟,程金湘,章翔. 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白研究进展[J]. 中华神经外科疾病研究杂志,2011,01（13）:85-88.
[3]李进,邹祥. 雷帕霉素及其衍生物开发现状、作用机制及生物合成研究进展[J]. 中国抗生素杂志,2011,11（02）:806-813.
[4]穆云龙. 雷帕霉素研究进展[J]. 河北化工,2010,01（08）:21-23.