【摘 要】
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为了同时检测奶牛乳房炎多种病原菌,试验采用金黄色葡萄球菌（S.aureus）nuc基因、牛支原体（M.bovis）oppD/F基因、大肠杆菌（E.coli）16S-23S rRNA基因内转录间隔区作为靶标设计3对特异性引物,在优化单菌退火温度的基础上确定多重PCR的退火温度,建立S.aureus、M.bovis和E.coli的多重PCR检测方法,验证多重PCR的重复性、特异性、敏感性及实用性。结果
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31660724）； 内蒙古自然科学基金项目（2016MS0331）；
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为了同时检测奶牛乳房炎多种病原菌,试验采用金黄色葡萄球菌（S.aureus）nuc基因、牛支原体（M.bovis）oppD/F基因、大肠杆菌（E.coli）16S-23S rRNA基因内转录间隔区作为靶标设计3对特异性引物,在优化单菌退火温度的基础上确定多重PCR的退火温度,建立S.aureus、M.bovis和E.coli的多重PCR检测方法,验证多重PCR的重复性、特异性、敏感性及实用性。结果表明:基于单一PCR三者共同的最佳退火温度（55.3℃、56.5℃、57.8℃）优化多重PCR退火温度,最终确定57.8℃为三者最佳的退火温度。该方法能扩增出长度为237 bp（S.aureus）、333 bp（M.bovis）、634 bp（E.coli）的基因片段;靶标菌特异性扩增而非靶标菌无扩增条带,最低检测浓度分别为S.aureus 1 pg/μL、M.bovis 1 pg/μL、E.coli 100 fg/μL;正常乳样和临床乳房炎乳样均检出S.aureus（25.9%、53.8%）、M.bovis（10.3%、17.9%）和E.coli（32.8%、71.8%）,但乳房炎乳样的阳性检出率高于正常乳样。说明本研究建立的多重PCR方法特异性和敏感性强、稳定性和实用性高,具有良好的推广应用前景。
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