花生AFLP—银染体系的建立与优化

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通过对影响花生AFLP—银染技术体系的关键因素作对比研究,建立了一套优化的花生AFLP分子标记体系,该体系在应用于花生AFLP研究时,能够得到清晰的分子标记图谱,实验结果重复性好,稳定可靠。优化的关键因素为:①采用细玻璃棒勾取DNA,而非离心的方法,可得到高纯度大分子量的DNA样品;②酶切DNA模板为300ng;③酶切体系中,EcoRI和MseI分别加入4U,使用NEBbuffer2;④连接最适温度为16℃过夜:⑤预扩时PCR循环预变性时间为1min;⑥预扩产物最佳稀释倍数为75倍。
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