【摘 要】
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目的 研制鼠抗人GL50分子单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究. 方法以天然高表达人GL50分子的Daudi细胞为免疫原,人GL50-L929转基因细胞为目的单克隆抗体(McAb)的筛选细胞,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获得分泌特异性鼠抗人GL50分子McAb的杂交瘤细胞株;免疫荧光标记和流式细胞术分析McAb识别GL50的表达;Western blot检测抗体对特异性细胞膜蛋白的识别;台盼蓝(
【机 构】
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215007,苏州大学医学生物技术研究所,江苏省临床免疫学重点实验室,215007,苏州大学医学生物技术研究所,江苏省临床免疫学重点实验室,215007,苏州大学医学生物技术研究所,江苏省临床免疫学重
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目的 研制鼠抗人GL50分子单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究. 方法以天然高表达人GL50分子的Daudi细胞为免疫原,人GL50-L929转基因细胞为目的单克隆抗体(McAb)的筛选细胞,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获得分泌特异性鼠抗人GL50分子McAb的杂交瘤细胞株;免疫荧光标记和流式细胞术分析McAb识别GL50的表达;Western blot检测抗体对特异性细胞膜蛋白的识别;台盼蓝(Trypan blue)染色细胞计数法和MTT法检测McAb对Daudi 细胞体外生长的抑制作用;3H-TdR法检测抗体对GL50-L转基因细胞介导的活化T细胞体外增殖的效应. 结果成功制备2株分泌特异性抗人GL50抗体的杂交瘤细胞株12B11和11C4;两者皆为IgG2a亚型;腹水效价皆在1∶1000以上;12B11、11C4特异性地识别GL50分子.11C4 McAb可以明显抑制Daudi细胞在体外的生长,并可抑制GL50-L转基因细胞介导的活化T淋巴细胞的体外增殖效应. 结论成功获得了2株特异性鼠抗人GL50抗体,其中11C4 McAb具有诱导表达GL50分子的B淋巴瘤细胞Daudi的体外生长抑制作用;在T淋巴细胞体外增殖反应中发挥了重要的调节作用。
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