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摘要： 为了研究八角茴香的抑菌效果。用95%酒精和无菌水提取出八角茴香的抑菌活性物质，配置好培养基后将大肠杆菌菌液涂布，利用滤纸片扩散法研究这种中药的抑菌效果。95%酒精提取或无菌水提取的这种中药具有抑菌效果，从抑菌圈的大小能反应出八角茴香的抑菌能力大小不同。利用95%酒精提取的效果优于无菌水提取。
关键词：八角茴香； 大肠杆菌； 纸片扩散法； 抑菌效果
Bacteriostatic test of star anise and Chinese prickly ash
Abstract： in order to study the antibacterial effect of Illicium verum. The antibacterial active substances of Illicium verum were extracted with 95% alcohol and sterile water. After the medium was laid， the Escherichia coli liquid was coated， and the bacteriostatic effect of the Chinese medicine was studied by filter paper diffusion method. 95% alcohol extraction or aseptic water extraction of this kind of Chinese medicine has bacteriostatic effect， from the size of the bacteriostatic ring can reflect the antibacterial ability of star anise is different in size. The result of 95% alcohol extraction is better than that of aseptic water extraction.
Key words： star anise； Escherichia coli； disk diffusion method； bacteriostatic effect
八角茴香的抑菌实验
1.前言
越来越多的化学农药在使用过程中对环境的破坏，已经引起人们的关注。有很多植物是抑菌活性物质的天然宝库，产生的代谢产物高出40万种 [1～4]。从植物的代谢物中提取或者人工开发出来的新型抑菌杀虫药物，渐渐成为现代的药物热点之一[5]。
八角茴香（Illicium verum Hook.f.）即大茴香，属木兰常绿乔木，形状很特殊，果实有五个角，呈五角星的形状，成熟后表现为棕红色[6]。是我国特产的中药，可以刺激神经，具有殺菌止痛，防流感的作用[7]。
2.材料
2.1菌种
大肠杆菌（Eseherichia coli），由山西大同大学生物系微生物实验室提供。
2.2中药提取物
市场购买的八角茴香。
2.3试剂药品
牛肉膏，蛋白胨，NaCl，95%酒精，0.1 mol/l NaOH溶液，无菌水。
2.4仪器
全自动数显立式高压蒸汽灭菌锅（上海博讯医疗生物仪器股份有限公司）、电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）、数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）、全温振荡培养箱（常州市金坛晨阳电子仪器厂）、生化培养箱（武汉博尔斯科学仪器设备有限公司）。
3.实验方法
3.1中药提取液的制备
取市场购买的八角茴香的果实，洗净自然晾干，捣碎，称取10 g，2份。使用95%酒精提取，在两份材料中分别加入100 ml 95%乙醇试剂和无菌水。选用60℃水浴2 h提取3次，过滤并合并滤液，八角母液浓度为0.1 g/ml，移到锥形瓶中，最后密封在冰箱中4℃冷藏备用[8]。
3.2提取液梯度制备
取若干15 ml试管。设95%酒精提取的八角为A组；无菌水提取的八角为B组。各设置10%、20%、30%的浓度梯度并设有空白对照。每组4个试管。
3.3纸片扩散法的抑菌测定
3.3.1菌种活化培养和菌悬液制备
实验前一天将大肠杆菌富集培养，置于全温震荡培养箱中37℃，150 r/min下培养过夜。用生理盐水调整菌液浓度。
3.3.2滤纸片制备
将滤纸片剪成6 mm的圆片状，并进行灭菌。
3.3.3平板涂布
分配置液体、固体培养基灭菌，别取3～4滴菌悬液滴加于灭菌后的固体培养基表面，涂抹均匀。
取滤纸片分别放入A、B组试管中浸泡后取出来，每个皿上做4个重复，然后放在恒溫培养箱中，设置温度为37℃。培养一天后，取实验效果好的培养皿测定抑菌圈大小。
4.结果与分析
4.1抑菌圈的测定结果
测量2组实验得到的抑菌圈大小，同一培养皿内4个抑菌圈取平均值，整理数据如表2。由抑菌圈直径的大小得到敏感度表3。（20 mm以上极敏，15-20 mm高敏，10-14 mm中敏，10 mm以下低敏，0 mm不敏[9]）。
Table 2 diameter of the average inhibitory circle in the four experiments of A， B
Table 3 sensitivity of four groups of experiments： A， B
由表2可知，八角茴香的提取物浓度越高，抑菌效果越强。
5.讨论
最终的结果发现，菌体培养一段时间后分别加入这种中药的浸提液继续培养，八角茴香用95%酒精提取的方法要优于用无菌水。
实验表明，八角茴香提取物的抑菌效果较好。但是一般其成分极其复杂，介于实验室和器材的局限性，并且八角茴香的产地、生长环境、品种质量和提取物的提取工艺方法等因素有许多的不同之处，这些都会对实验结果产生一些影响。对于提取液中什么成分对什么菌种的抑制效果和抑菌得机理还需要进一步研究和探讨。
参考文献：
[1] 李金培， 张玉珍. 植物源农药的利用[J]. 世界农业， 1998， （12）： 28-30.
[2] 张雁冰， 艾国民， 王克让， 等. 马桑叶提取物的杀虫杀菌活性初步研究[J]. 河南农业科学， 2006， （01）： 60-63.
[3] 孟庆杰， 王光全. 植物激素及其在农业生产中的应用[J]. 河南农业科学， 2006， （04）： 9-12.
[4] 杜华， 王玲， 孙炳剑， 等. 防治植物病害的生物农药研究开发进展[J]. 河南农业科学， 2004， （09）： 39-42.
[5] 周红晞. 高等植物源农药[J]. 农药译丛， 1994， （02）： 1-6.
[6] 林祁. 八角属植物的分类学订正[J]. 植物分类学报， 2000， （02）： 167-181.
[7] 靳士英， 娄海容. 八角茴香与达菲[J]. 现代医院， 2006， （03）：6-9..
[8] 孟昭礼， 吴献忠， 高庆霄， 等. 银杏提取液对四种植物病原菌的抑菌作用[J]. 植物病理学报， 1995， （04）： 357-360.
[9] WS/T 125-1999， 纸片法抗菌药物敏感试验标准[s].
关键词：八角茴香； 大肠杆菌； 纸片扩散法； 抑菌效果
Bacteriostatic test of star anise and Chinese prickly ash
Abstract： in order to study the antibacterial effect of Illicium verum. The antibacterial active substances of Illicium verum were extracted with 95% alcohol and sterile water. After the medium was laid， the Escherichia coli liquid was coated， and the bacteriostatic effect of the Chinese medicine was studied by filter paper diffusion method. 95% alcohol extraction or aseptic water extraction of this kind of Chinese medicine has bacteriostatic effect， from the size of the bacteriostatic ring can reflect the antibacterial ability of star anise is different in size. The result of 95% alcohol extraction is better than that of aseptic water extraction.
Key words： star anise； Escherichia coli； disk diffusion method； bacteriostatic effect
八角茴香的抑菌实验
1.前言
越来越多的化学农药在使用过程中对环境的破坏，已经引起人们的关注。有很多植物是抑菌活性物质的天然宝库，产生的代谢产物高出40万种 [1～4]。从植物的代谢物中提取或者人工开发出来的新型抑菌杀虫药物，渐渐成为现代的药物热点之一[5]。
八角茴香（Illicium verum Hook.f.）即大茴香，属木兰常绿乔木，形状很特殊，果实有五个角，呈五角星的形状，成熟后表现为棕红色[6]。是我国特产的中药，可以刺激神经，具有殺菌止痛，防流感的作用[7]。
2.材料
2.1菌种
大肠杆菌（Eseherichia coli），由山西大同大学生物系微生物实验室提供。
2.2中药提取物
市场购买的八角茴香。
2.3试剂药品
牛肉膏，蛋白胨，NaCl，95%酒精，0.1 mol/l NaOH溶液，无菌水。
2.4仪器
全自动数显立式高压蒸汽灭菌锅（上海博讯医疗生物仪器股份有限公司）、电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）、数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）、全温振荡培养箱（常州市金坛晨阳电子仪器厂）、生化培养箱（武汉博尔斯科学仪器设备有限公司）。
3.实验方法
3.1中药提取液的制备
取市场购买的八角茴香的果实，洗净自然晾干，捣碎，称取10 g，2份。使用95%酒精提取，在两份材料中分别加入100 ml 95%乙醇试剂和无菌水。选用60℃水浴2 h提取3次，过滤并合并滤液，八角母液浓度为0.1 g/ml，移到锥形瓶中，最后密封在冰箱中4℃冷藏备用[8]。
3.2提取液梯度制备
取若干15 ml试管。设95%酒精提取的八角为A组；无菌水提取的八角为B组。各设置10%、20%、30%的浓度梯度并设有空白对照。每组4个试管。
3.3纸片扩散法的抑菌测定
3.3.1菌种活化培养和菌悬液制备
实验前一天将大肠杆菌富集培养，置于全温震荡培养箱中37℃，150 r/min下培养过夜。用生理盐水调整菌液浓度。
3.3.2滤纸片制备
将滤纸片剪成6 mm的圆片状，并进行灭菌。
3.3.3平板涂布
分配置液体、固体培养基灭菌，别取3～4滴菌悬液滴加于灭菌后的固体培养基表面，涂抹均匀。
取滤纸片分别放入A、B组试管中浸泡后取出来，每个皿上做4个重复，然后放在恒溫培养箱中，设置温度为37℃。培养一天后，取实验效果好的培养皿测定抑菌圈大小。
4.结果与分析
4.1抑菌圈的测定结果
测量2组实验得到的抑菌圈大小，同一培养皿内4个抑菌圈取平均值，整理数据如表2。由抑菌圈直径的大小得到敏感度表3。（20 mm以上极敏，15-20 mm高敏，10-14 mm中敏，10 mm以下低敏，0 mm不敏[9]）。
Table 2 diameter of the average inhibitory circle in the four experiments of A， B
Table 3 sensitivity of four groups of experiments： A， B
由表2可知，八角茴香的提取物浓度越高，抑菌效果越强。
5.讨论
最终的结果发现，菌体培养一段时间后分别加入这种中药的浸提液继续培养，八角茴香用95%酒精提取的方法要优于用无菌水。
实验表明，八角茴香提取物的抑菌效果较好。但是一般其成分极其复杂，介于实验室和器材的局限性，并且八角茴香的产地、生长环境、品种质量和提取物的提取工艺方法等因素有许多的不同之处，这些都会对实验结果产生一些影响。对于提取液中什么成分对什么菌种的抑制效果和抑菌得机理还需要进一步研究和探讨。
参考文献：
[1] 李金培， 张玉珍. 植物源农药的利用[J]. 世界农业， 1998， （12）： 28-30.
[2] 张雁冰， 艾国民， 王克让， 等. 马桑叶提取物的杀虫杀菌活性初步研究[J]. 河南农业科学， 2006， （01）： 60-63.
[3] 孟庆杰， 王光全. 植物激素及其在农业生产中的应用[J]. 河南农业科学， 2006， （04）： 9-12.
[4] 杜华， 王玲， 孙炳剑， 等. 防治植物病害的生物农药研究开发进展[J]. 河南农业科学， 2004， （09）： 39-42.
[5] 周红晞. 高等植物源农药[J]. 农药译丛， 1994， （02）： 1-6.
[6] 林祁. 八角属植物的分类学订正[J]. 植物分类学报， 2000， （02）： 167-181.
[7] 靳士英， 娄海容. 八角茴香与达菲[J]. 现代医院， 2006， （03）：6-9..
[8] 孟昭礼， 吴献忠， 高庆霄， 等. 银杏提取液对四种植物病原菌的抑菌作用[J]. 植物病理学报， 1995， （04）： 357-360.
[9] WS/T 125-1999， 纸片法抗菌药物敏感试验标准[s].