【摘 要】
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对构建的表达K88ac-ST1-LTB融合蛋白的重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5)进行了各项实验室试验.结果1～10代菌种染色特性、培养特性、生化特性、质粒遗传、目的蛋白表达、免疫原性等遗传稳定,基础种子代次暂定为1～10代;菌种保存试验确定,甘油保存菌种在-20℃保存期为2年,冻干保存菌种在-20℃保存期暂定为3年;最小免疫剂量测定结果每只小鼠的最小免疫剂量为0.1mL,每
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃,兰州,730000 大连大学生物工程学院,辽宁,大连,1160
【出 处】
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中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会
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对构建的表达K88ac-ST1-LTB融合蛋白的重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5)进行了各项实验室试验.结果1～10代菌种染色特性、培养特性、生化特性、质粒遗传、目的蛋白表达、免疫原性等遗传稳定,基础种子代次暂定为1～10代;菌种保存试验确定,甘油保存菌种在-20℃保存期为2年,冻干保存菌种在-20℃保存期暂定为3年;最小免疫剂量测定结果每只小鼠的最小免疫剂量为0.1mL,每头妊娠母猪的最小免疫剂量为2.5mL;制备的5批实验室产品均安全有效,安全和效力检验证实本动物和小鼠之间有着良好的平行关系,可以用小鼠作为本疫苗的安检、效检模型;试验中本疫苗保存18个月,仍具有良好的效力,保护率达80﹪以上,为了保证疫苗质量,并考虑疫苗在保存和应用中的各种不确定因素,将本疫苗的保存期暂定为12个月.为了进一步验证疫苗的安全性和有效性,于不同地区进行了田间试验,免疫妊娠母猪650头,产仔7156头,总保护率为98.24﹪,试验证明本疫苗安全性良好,新生仔猪通过母源抗体被动免疫可有效地预防大肠杆菌性腹泻的发生.
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本文根据Genebank中已发表的鸡IL-18基因序列设计引物,应用RT-PCR技术从IBV攻击的鸡脾细胞总RNA中扩增得到鸡IL-18成熟蛋白基因,将其克隆到PMD18-T载体中,进行序列测定,结果发现:该克隆的cDNA全长513bp,编码170个氨基酸.将该基因经HindⅢ和KpnⅠ双酶切后,插入同样经HindⅢ和KpnⅠ双酶切真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒,研制出分子
本研究根据Genebank中鸡IFN-γ和IL-2序列设计引物,采用RT-PCR法从地方品种山地乌骨鸡的外周淋巴细胞RNA中克隆了CHIFN-γ、CHIL-2基因,并进行了序列分析.结果发现:克隆的IFN基因cDNA全长549bp,开放阅读框为495bp,编码164个氨基酸.IL-2基因cDNA全长549bp,开放阅读框为432bp,编码143个氨基酸.将山地乌骨鸡IFN-γ、IL2基因测序结果与
该试验利用本室保存的山羊痘强毒组织毒,经羊体复壮繁殖后,采集发痘组织,加入保护剂,选择适当的冻干曲线进行冻干.冻干品外观良好,经2-4齿龄健康山羊体测定毒价,其ID50=10-5.5/0.2ml.试验取得了较满意的结果.
鸭源新城疫病毒(NDV-D10)和减蛋综合征病毒(EDSV)可以在鸭胚中同时良好增殖,两种病毒的血凝价分别与单独接种时一致;同胚增殖病毒对鸭胚或SPF鸡胚的感染能力和致病性分别与单独接种组无显著差异;利用同鸭胚增殖病毒的尿囊液制备的二联油乳剂灭活疫苗接种免疫鸡可以分别抵抗NDV强毒和EDSV强毒的攻击.
将经DNA-Star软件分析具有一定1型菌毛抗原差异性的鸡大肠杆菌M10(O11),GX7(O78)及YR10(O18)株,分别经营养肉汤37℃48h大容量培养后,提取O18菌毛制成单价1型菌毛油乳剂亚单位疫苗.然后制备O18全菌灭活苗及O11、O78、O18多价灭活疫苗.4周龄SPF鸡分组分别免疫接种O18菌毛油乳剂疫苗(每雏菌毛免疫量200μg)和O18菌毛菌体灭活苗,分别隔离饲养至7周龄.经
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