【摘 要】
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脂肪酶(三脂酰甘油酰基水解酶,EC 3.1.1.3),是一种能够催化由一个丙三醇分子和三个长链脂肪酸所构成酯类以及其他一些不溶性酯类水解、合成、转酯等反应的特殊酯键水解酶.脂肪酶应用广泛,其应用在烘培产品中具有强筋,增白,改善面包柔软度的作用,增加面包的保鲜期.疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)是一种耐热性好、位置特异性和区域选择性较强的
【机 构】
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华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州510006
【出 处】
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2016第五届中国食品安全高峰论坛
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脂肪酶(三脂酰甘油酰基水解酶,EC 3.1.1.3),是一种能够催化由一个丙三醇分子和三个长链脂肪酸所构成酯类以及其他一些不溶性酯类水解、合成、转酯等反应的特殊酯键水解酶.脂肪酶应用广泛,其应用在烘培产品中具有强筋,增白,改善面包柔软度的作用,增加面包的保鲜期.疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)是一种耐热性好、位置特异性和区域选择性较强的脂肪酶,但商业化的TLL价格偏高,限制了广泛应用.本研究将来自疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因经密码子优化后全基因合成,将常用毕赤酵母表达系统pPic9k的启动子更改为强启动子,构建了pHKA-TLL2分泌表达重组质粒.该重组质粒经限制性内切酶PmeⅠ线性化后使用电转化到毕赤酵母GS115,经三丁酸甘油酯平板筛选后,获得水解酶活较高的重组毕赤酵母GS 115/pHKA-TLL2.摇瓶发酵144h后,发酵酶活最高达到26U/ml.发酶液上清经简单分离纯化后,用于该脂肪酶酶学性质的研究.其最适底物为对硝基苯酚己酸酯,最适作用温度为55℃,最适作用pH为9.0,具有中温偏碱的特性.金属离子敏感性实验发现,Ca2+、Mn2+、Zn2+对酶有强烈的激活作用,Cu2+、Fe2+、Fe3+、K+、Li+、Na+、Co2+对酶有强烈抑制作用,Ba2+、Mg2+、Ni2+对酶影响不大.
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