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目的：对枸橼酸芬太尼、枸橼酸舒芬太尼和盐酸瑞芬太尼的色谱保留规律和ESI质谱裂解规律进行系统研究。方法：采用HPLC法分离枸橼酸芬太尼、枸橼酸舒芬太尼和盐酸瑞芬太尼及其相关中间体杂质，并结合其结构特点对其色谱保留行为进行研究；将三种芬太尼类药物及其杂质直接导入ESI质谱仪中，通过各化合物的一级、二级质谱图对其裂解规律进行研究。结果：芬太尼药物色谱保留主要受其哌啶母核1位和4位侧链取代基极性的影响；芬太尼类药物均易裂解丢失C6H5NHCOC2H5的中性分子，产生M-149的碎片离子。结论：本试验为芬太尼类药物的质量研究和标准修订提供理论依据。