目的:探讨在蛋白溶液中含有干扰物质（如色氨酸等）时,使用紫外-可见光检测器的高效液相色谱峰面积对蛋白含量直接测量的可行性,探讨绝对定量公式应用前提并进行部分验证。方法:通过理论推导得出谱图峰面积与蛋白含量之间的关系式,在以下三方面检验公式及其成立前提:（1）用紫外一可见光分光光度计测定白蛋白溶液250～350 nm最大吸收波长和该波长下的吸收值（A）,同一溶液用不接色谱柱的高效液相色谱分析,通过转换公式:吸收值（A）=流速（F）×峰面积（S）/上样体积（V）,计算在某波长下吸收值A_UV-HPLC,进而计算与UV测量值(A_UV)之比百分数,得到回收率;（2）通过pH、氯化钠浓度和乙腈浓度变化来检验白蛋白最大吸收波长和该波长下消光系数的稳定性:（3）估计SEC-HPLC系统误差。结果:推导所得公式为:蛋白含量（C）=流速（F）×峰面积（S）/蛋白消光系数（ε）/样品池长（p）/上样体积（V）,公式成立前提:其一为系统误差可忽略不计;其二蛋白消光系数可视为不变。当高效液相色谱流速在0.8～1.0 mL·min^-1之间、上样体积在20～100μL范围内白蛋白溶液回收率约为100%。当溶液pH在4.0～8.6之间、氯化钠浓度在2 mol·L^-1以下时,白蛋白消光系数和最大吸收波长稳定,但乙腈浓度在50%以下时,白蛋白消光系数最大有约5%的增加。SEC-HPLC分析白蛋白的重复性相对标准差均小于1%,各蛋白上样量36.5,29.2,21.9,14.6,7.3 ng试验点的相对标准差分别为0.6%,0.7%,1.0%,1.4%,2.7%。结论:该公式在特定条件下成立,使用紫外-可见光检测器的高效液相色谱无标准品直接测量蛋白含量可行。