【摘 要】
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目的：利用大肠杆菌表达系统,表达人高密度脂蛋白受体CLA-1胞外结构域. 方法：PCR扩增CLA-1胞外结构域(sCLA-1)DNA片段,克隆至pET-30a(+)中构建重组表达载体pET-sCLA,并转化E.
【机 构】
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100050 北京,中国医学科学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室
【出 处】
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2014年中国药学大会暨第十四届中国药师周
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目的：利用大肠杆菌表达系统,表达人高密度脂蛋白受体CLA-1胞外结构域.
方法：PCR扩增CLA-1胞外结构域(sCLA-1)DNA片段,克隆至pET-30a(+)中构建重组表达载体pET-sCLA,并转化E.coli BL21(DE3)获得重组菌株BL21/pET-sCLA.用ZYM-5052培养基进行表达研究,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.目的蛋白经纯化后用ELISA方法检测其与配基高密度脂蛋白(HDL)的结合活性.
结果：重组菌株表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,在分子量约40 kDa处出现特异性条带.但目的蛋白可溶性表达较低,主要以包涵体形式存在.ELISA证实表达产物上清和复性后的包涵体蛋白与配基均具有结合活性.
结论：在大肠杆菌中成功表达CLA-1蛋白胞外结构域,与配基HDL具有较好的结合活性.
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