【摘 要】
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目的：构建人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)基因的shRNA慢病毒表达载体并获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响. 方
【机 构】
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第三军医大学药剂学教研室,重庆 400038
【出 处】
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中国药理学会抗炎免疫药理专业委员会第十一届全国学术会议
论文部分内容阅读
目的：构建人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)基因的shRNA慢病毒表达载体并获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响.
方法：通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技术构建pGLV-EGFP-shRNA慢病毒表达质粒,并测序鉴定.将构建的表达质粒和包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度.将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株后,Western blot法检测LAMP2A表达,验证蛋白表达抑制效果.采用1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L的紫杉醇处理LAMP2A低表达乳腺癌细胞株后,用MTT法观察LAMP2A低表达组和对照组之间增值效率的差异.
结果：测序结果显示重组慢病毒质粒构建正确,病毒滴度达2×108TU/mL.乳腺癌稳定细胞株中LAMP2A蛋白表达量显著降低.在10nmol/L、100nmol/L紫杉醇处理后,LAMP2A低表达乳腺癌细胞株对紫杉醇耐药性明显降低(P＜0.05).
结论：成功构建了人的LAMP2A基因shRNA慢病毒载体,获得了稳定低表达LAMP2A的乳腺癌细胞株,证实LAMP2A能够增强乳腺癌细胞株对紫杉醇的耐药性.
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