蝶蛹金小蜂毒液丝氨酸蛋白酶抑制剂Pp Serpin4的克隆与表达模式研究

来源 :中国植物保护学会2014年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wwyufo
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  寄生蜂是重要的农业害虫天敌,在生物防治中发挥着相当重要的作用,寄生蜂在产卵过程中,伴随有毒液、类病毒颗粒、多分DNA病毒、畸形细胞等寄生因子一并注入寄主体内,通过调控寄主免疫反应和寄主的生长发育,以保护其子代能够在寄主体内正常发育.蝶蛹金小蜂(Pteromalus puparum)是十字花科蔬菜害虫菜粉蝶(Pieris rapae)蛹期优势内寄生蜂,其仅含有毒液一种寄生因子.丝氨酸蛋白酶抑制剂( serine proteinaseinhibitor,serpin)在哺乳动物血液和昆虫的血淋巴中均有发现,能够调节昆虫体内多种免疫反应,其中,包括抑制丝氨酸蛋白酶的活性.通过蝶蛹金小蜂雌虫转录组数据筛选出Pp Serpin 4基因部分全长,对其在蝶蛹金小蜂头、胸、腹(不包括毒囊毒腺和卵巢)、卵巢、毒囊毒腺各组织中的表达情况进行定量分析,发现它在毒囊毒腺中特异高表达.通过3’和5 RACE克隆得到蝶蛹金小蜂的Pp Serpin 4基因的全长.Pp Serpin 4基因全长2623bp,开放式阅读框长1923bp,5非编码区长35bp,3非编码区长665bp,共编码641个氨基酸,预测分子量为72.3kD,通过SignalP分析,前23个氨基酸为信号肽,说明Pp Serpin 4为分泌表达蛋白.将去信号肽的Pp Serpin 4的氨基酸全序列与其他物种中的serpm序列进行同源性比较,构建系统进化树,结果表明,Pp Serpin 4和丽蝇蛹集金小蜂(Nasonia vitripennis)的leukocyte elastase inhibitor isoform X2相似性最高.对蝶蛹金小蜂头、胸、腹(不包括毒囊、毒腺和卵巢)、卵巢、毒囊和毒腺各组织蛋白进行Westernblot,发现它在毒囊和毒腺中特异性高表达.
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