木霉(T.harzianum)是一类重要的生防真菌,具有拮抗广谱性、适应性强和多重作用机制等特点,因而被广泛应用。探寻木霉菌分生孢子产生与调控机制、木霉菌与植物及病原菌的表面识别与互作机制,对提高木霉菌分生孢子产率、增强生防作用能力有重要意义。疏水蛋白是仅在真菌中发现的一类富含半胱氨酸(Cys)的小分子蛋白,能够参与真菌细胞壁组成、气生菌丝和孢子的形成,参与宿主表面识别等多种生物学过程。本研究前期研究发现,生防菌哈茨木霉Th33中含有6个疏水蛋白基因,它们在木霉菌生长和产孢过程中,具有不同的表达模式。为探索疏水蛋白的功能,本研究首先克隆了6个疏水蛋白基因hyd1-6,分析显示,它们均编码Ⅱ型疏水蛋白。其中hyd4 cDNA全长312bp,编码103个氨基酸,hyd6 cDNA全长309bp,编码蛋白含102个氨基酸。分别构建了hyd4和hyd6的原核表达载体pET-28a-hyd4和pET-28a-hyd6,转入E.coli BL21(DE3)中,经过筛选和验证,获得阳性转化子,并分别诱导表达了与理论大小相符的融合蛋白Hyd4和Hyd6,优化的诱导表达条件为:28℃下培养,IPTG 0.5mmol/L诱导5h,蛋白表达效果最佳。通过镍柱纯化,超滤管浓缩、除盐等方法获得了纯化的疏水蛋白。利用这两种疏水蛋白处理三生烟,均能引起烟草叶片HR反应,同时检测到活性氧物质、胼胝质在烟草叶片的累积;疏水蛋白处理烟草悬浮细胞,能够检测到烟草悬浮细胞胞外碱化,以及酚类物质的累积。上述结果表明,疏水蛋白Hyd4和Hyd6均能引起烟草防御反应中的早期反应,推测疏水蛋白Hyd4和Hyd6属于蛋白类激发子,其诱导植物防御反应的机制和对植物抗病性的影响,有待进一步研究。