【摘 要】
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目的 深入研究磷酸化PTEN蛋白在DNA损伤修复中的作用.方法 以HeLa,AO-3细胞为研究对象,采用免疫荧光、蛋白印迹以及大规模染色质松弛技术,探讨核定位PTEN与DNA损伤修复的关系.结果 DNA受到损伤后磷酸化PTEN-Ser380蛋白在细胞核内富集,呈点状分布,与ATM-Ser1981和γ-H2AX有共定位.磷酸化PTEN-Ser380富集过程有独特的动力学,在DNA损伤5h后,仍能检测
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850 军事医学科学院生物工程研究所,北京10085
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目的 深入研究磷酸化PTEN蛋白在DNA损伤修复中的作用.方法 以HeLa,AO-3细胞为研究对象,采用免疫荧光、蛋白印迹以及大规模染色质松弛技术,探讨核定位PTEN与DNA损伤修复的关系.结果 DNA受到损伤后磷酸化PTEN-Ser380蛋白在细胞核内富集,呈点状分布,与ATM-Ser1981和γ-H2AX有共定位.磷酸化PTEN-Ser380富集过程有独特的动力学,在DNA损伤5h后,仍能检测到PTEN-pS380与DNA标志物γ-H2AX共定位.ATM/DNA-PKcs/Chk2激酶抑制剂处理HeLa细胞,蛋白印迹实验发现PIKK/Chk2抑制剂明显降低PTEN蛋白Ser380磷酸化水平.利用大规模染色质松弛细胞模型,发现PTEN蛋白诱导染色质松弛,该功能依赖于羧基端PEST基序磷酸化和氨基端的磷酸酶结构域.结论 磷酸化PTEN蛋白以PIKK/Chk2激酶依赖的方式,通过调控染色质结构参与DNA损伤修复反应.
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