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目的:牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)是慢性牙周炎的主要致病菌,具有多种毒力因子以黏附并侵入牙龈上皮细胞,逃避宿主免疫机制,实现长期存活和增殖,这一过程可能是由于激活了细胞自噬。研究发现,富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)活化在细菌感染中发挥重要作用;前期实验证明P.gingivalis感染牙龈上皮细胞过程中发生Pyk2活化。目前P.gingivalis引起牙龈上皮细胞发生自噬的报道较少见,细胞自噬和P.gingivalis感染牙龈上皮细胞活化Pyk2之间的关系尚不得而知。因此,本课题通过深入研究相关分子表达,分析二者之间关系,以揭示牙周致病菌的致病机理。材料与方法:建立P.gingivalis ATCC33277感染细胞模型,以MOI 100:1作用于epi4细胞,感染时间分别为1h、2h、4h、6h、12h,显微镜观察细胞形态;细胞形态学观察Pyk2蛋白表达量变化;透射电镜检测自噬体囊泡;Real-time PCR方法检测Pyk2、LC3Ⅱm RNA水平;Western-blot方法检测Pyk2、LC3Ⅱ蛋白质水平。预先用特异性Pyk2抑制剂1μM TAE226(Pyk2 Kinase Inhibitor)、1μM DMSO对照处理正常细胞24h后进行P.gingivalis感染实验,检测LC3Ⅱm RNA、蛋白质水平。结果:1、P.gingivalis感染细胞后,Pyk2蛋白主要表达在细胞浆,Pyk2 m RNA、蛋白表达量随时间依赖性升高,各组之间差异有统计学意义(P<0.05);2、P.gingivalis感染细胞可观察到大量双层膜结构自噬囊泡;LC3Ⅱm RNA、蛋白表达量在1h后随时间依赖性升高,各组之间差异有统计学意义(P<0.05);3、抑制剂处理后LC3Ⅱm RNA表达下调,蛋白表达量下调,处理组、对照组、正常组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、在P.gingivalis感染牙龈上皮细胞过程中,Pyk2表达与感染时间正相关;2、P.gingivalis感染牙龈上皮细胞过程发生细胞自噬,1h后LC3Ⅱ表达与感染时间正相关;3、P.gingivalis感染牙龈上皮细胞过程可能通过调节Pyk2表达影响细胞自噬过程,进而影响感染进程。