【摘 要】
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目的：构建pPICZαA-EPF载体,电转入毕赤酵母GS115细胞中诱导表达rEPF蛋白,筛选能稳定分泌表达rEPF蛋白的毕赤酵母GS115细胞株,获取大量具有较高免疫原性的早孕因子(EPF)重组蛋
【机 构】
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广州医科大学公共卫生学院广州市东风西路195号510182
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目的：构建pPICZαA-EPF载体,电转入毕赤酵母GS115细胞中诱导表达rEPF蛋白,筛选能稳定分泌表达rEPF蛋白的毕赤酵母GS115细胞株,获取大量具有较高免疫原性的早孕因子(EPF)重组蛋白.
方法：优化EPF基因编码碱基序列,并在其末端融合6×His碱基序列,合成EPF-His基因,构建pPICZαA-EPF载体.将重组表达质粒pPICZαA-EPF转化大肠杆菌DH5αE.coli,提取pPICZαA-EPF质粒,经xhoI/NotI双酶切、测序鉴定.重组质粒经sacI限制性内切酶酶切线性化,并电转化入毕赤酵母GS115细胞,zeocin抗性培养基筛选重组酵母.接种重组酵母于BMGY/BMMY培养基,甲醇诱导分泌表达,筛选能稳定分泌表达的毕赤酵母GS115细胞株,表达产物经SDS-PAGE、Western-blot及Ea-RIT鉴定.
结果：成功合成EPF-His基因片段并构建pPICZαA-EPF载体.转化后的毕赤酵母GS115,经诱导后表达EPF重组蛋白;筛选出一株能稳定分泌表达EPF的毕赤酵母GS115细胞株3760-6.SDS-PAGE结果显示表明重组蛋白分子量为18kDa;Western blotting实验显示EPF重组蛋白与抗His标签单克隆抗体有特异性结合,经Ea-RIT结果表明其具有EPF样活性.
结论：成功构建了EPF的pPICZαA-EPF表达载体,筛选出能胞外稳定表达rEPF的GS115细胞株,并获得了具有生物学特性的EPF重组蛋白.
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