【摘 要】
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放射致DNA 损伤应答是细胞在放射损伤下维持细胞稳态的重要调控机制，其在DNA 的复制、细胞的分裂或基因组损伤修复中具有重要意义.mRNA 的N6-甲基腺嘌呤修饰(m6A)被证实在细胞发育和疾病发生等方面具有重要作用，研究m6A 修饰参与的放射损伤应答可以从表观遗传层面对DNA 损伤应答的调控作用以及机制进行新的阐释.目的：为表观遗传层面辐射损伤的研究奠定基础，同时发现重要靶分子为放射损伤的生物学
【机 构】
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军事医学研究院辐射医学研究所(北京),100850
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
论文部分内容阅读
放射致DNA 损伤应答是细胞在放射损伤下维持细胞稳态的重要调控机制，其在DNA 的复制、细胞的分裂或基因组损伤修复中具有重要意义.mRNA 的N6-甲基腺嘌呤修饰(m6A)被证实在细胞发育和疾病发生等方面具有重要作用，研究m6A 修饰参与的放射损伤应答可以从表观遗传层面对DNA 损伤应答的调控作用以及机制进行新的阐释.目的：为表观遗传层面辐射损伤的研究奠定基础，同时发现重要靶分子为放射损伤的生物学防护提供新的靶点.方法：以Hela 和A549 细胞作为主要研究对象，采用钴-60源放射所产生的γ射线照射细胞，检测细胞m6A 甲基化转移酶，阅读蛋白，去甲基化酶的变化规律，以及其对mRNA 整体m6A 甲基化的影响；通过对METTL3 转录因子活性以及泛素化通路等的鉴定，鉴定γ射线照射对METTL3 表达影响的机制；通过m6A测序分析METTL3 靶向的潜在的效应分子，鉴定METTL3 在放射所致细胞mRNA m6A修饰水平变化中的作用以及靶分子的作用机制；通过影响METTL3 表达水平，鉴定其对细胞表型以及DNA 损伤修复的影响.结果：γ射线降低细胞总mRNA 的整体m6A 修饰水平，抑制m6A 甲基化转移酶METTL3 表达；γ射线对细胞METTL3 泛素化水平没有明显影响，但是其可以抑制METTL3 转录活性；敲低Hela 和A549 细胞内METTL3表达，使γ射线照射后在周期G0/G1 期的细胞数降低，回复实验中过表达METTL3 可以使其逆转；同时敲低细胞内METTL3 表达可以抑制Hela 和A549 细胞增殖.结论：在辐射损伤应答过程中，γ射线照射导致METTL3 的转录活性降低，通过影响潜在的参与DNA 损伤修复的靶分子的m6A 甲基化水平，从而影响细胞G0/G1 期的DNA 损伤修复.其中具体参与γ射线致METTL3 转录抑制的转录因子，和METTL3 表达影响下影响DNA损伤修复的效应靶分子及其机制还需要后续实验验证.
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