【摘 要】
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目的:构建ltB/ctB-ompL1/1融合基因及其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性,检测问号钩端螺旋体（简称钩体）野生株ompL1基因的携带、表达情况和钩体病人血清特异性抗体
【机 构】
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绍兴文理学院医学院; 浙江大学医学院病原生物学教研室;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(39970678)
论文部分内容阅读
目的:构建ltB/ctB-ompL1/1融合基因及其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性,检测问号钩端螺旋体（简称钩体）野生株ompL1基因的携带、表达情况和钩体病人血清特异性抗体。方法:采用连接引物PCR 构建ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE 检测目的重组蛋白rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达情况。采用Western Blot 和GM1-ELISA 分别检测上述目的重组蛋白的免疫原性和佐剂活性。采用PCR 和MAT分别检测97株问号钩体野生株ompL1基因及其表达情况。采用ELISA 检测228例钩体病人血清ompL1基因产物的抗体。结果:与报道的相关序列比较,ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.7%～99.9%和99.5%～100%。rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达产量均约为细菌总蛋白的10%,主要以包涵体形式存在。rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1均分别能与rOmpL1/1兔抗血清和牛GM1 结合。89.7%（87/97）问号钩体野生株含有ompL1基因,87.6%（85/97）问号钩体野生株分别与rOmpL1/1和rOmpL1/2兔抗血清出现效价范围为1:4～1:256的MAT阳性结果。86.8%（198/228）和88.6%（202/228）的病人血清标本分别rOmpL1/1和rOmpL1/2抗体阳性。结论:本文成功地构建了ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因及其原核表达系统。所表达的rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1融合蛋白有良好的免疫原性和佐剂活性。ompL1是不同问号钩体血清群中广泛存在和高频率表达的基因,且其不同基因型的表达产物有广泛的抗原和抗体交叉。rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1具有成为问号钩体属特异性疫苗抗原的良好前景。
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