【摘 要】
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目的 研究蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)在人结直肠癌中的作用及其表观遗传学机制.方法 采用Real-Time PCR和Western blot等检测PRMT5在人结直肠癌患者和人结直肠癌细胞株中的表达差异.用Cell Counting Kit-8和BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型检测PRMT5 siRNA对人结直肠癌细胞的体内外抗肿瘤活性.用抗PRMT5、抗组蛋白H3R8和抗H4R3抗体对人结
【机 构】
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四川大学华西医院国家成都新药安全性评价中心,四川成都610041
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目的 研究蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)在人结直肠癌中的作用及其表观遗传学机制.方法 采用Real-Time PCR和Western blot等检测PRMT5在人结直肠癌患者和人结直肠癌细胞株中的表达差异.用Cell Counting Kit-8和BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型检测PRMT5 siRNA对人结直肠癌细胞的体内外抗肿瘤活性.用抗PRMT5、抗组蛋白H3R8和抗H4R3抗体对人结直肠癌细胞进行染色质免疫共沉淀(ChIP),荧光定量PCR分析不同处理细胞FGFR3和elF4E基因启动子区甲基化H3R8和H4 R3水平.结果 与癌旁组织比,PRMT5在人结肠患者癌组织中的表达明显增高,mRNA和蛋白水平分别为78.1％ (25/32)和83.3(10/12).同时,与人正常肠上皮FHC细胞比,PRMT5在HCT116和SW480等7株人结肠癌细胞中的表达也均有不同程度增高.通过siRNA敲除PRMT5后,在体内外均可抑制HCT116和SW480等人结直肠癌细胞的增殖克隆及裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制率在30％ ～60％之间,且与相应的对照组比,差别均有显著性(P＜0.05).此外,RT-PCR结果显示,与癌旁组织比,FGFR3和elF4E在人结直肠癌患者癌组织中的表达也明显升高,分别为75.0％ (15/20)和80.0(16/20).经PRMT5 siRNA处理后,FGFR3和elF4E在人结直肠癌细胞中的蛋白含量则显著降低.ChIP实验结果,与siRNA对照组细胞比,PRMT5 siRNA处理组FGFR3和/或elF4E基因启动子区H3R8和H4R3甲基化水平分别降低0.67和0.60倍(P＜0.01)和0.87和0.58倍(P＜0.05).结论 PRMT5在人结直肠癌患者的癌组织和人结直肠癌细胞株中表达均异常升高.PRMT5敲除后在动物体内和体外均可显著抑制人结直肠癌细胞的增殖克隆及裸鼠皮下抑制瘤的生长,其机制可能是PRMT5 siRNA降低FGFR3和elF4E基因启动子区甲基化作用,致使FGFR3和elF4E等癌基因合成减少.
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