【摘 要】
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目的:探讨去分化脂肪(dedifferentiated fat,DFAT)细胞向心肌细胞分化的可能性,旨在为治疗心肌梗死、心脏生物起搏器的构建提供新的种子细胞. 方法:用天花板培养法分离获
【机 构】
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第二军医大学生物医学工程研究所,上海市翔殷路80号,200433
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目的:探讨去分化脂肪(dedifferentiated fat,DFAT)细胞向心肌细胞分化的可能性,旨在为治疗心肌梗死、心脏生物起搏器的构建提供新的种子细胞.
方法:用天花板培养法分离获得大鼠DFAT细胞并鉴定;5-AZA、EBIO、与新生鼠窦房细胞共培养等方法对DFAT细胞进行诱导,观察形态变化,用RT-PCR和免疫细胞化学检测心肌和起搏细胞标记物,并将其与静息心室肌细胞共培养观察其带动心肌细胞跳动的情况.
结果:获得的DFAT细胞与间充质干细胞类似,可以表达CD29, CD44和CD90,但不表达CD31和CD34,可以向脂肪细胞和骨细胞方向分化。在培养中未发现自发性搏动的细胞。5-AZA、EBIO、与新生鼠窦房细胞共培养诱导后,细胞变大,并呈长梭形,表达心脏早期标志基因GATA-4和Nkx2.5、心肌相关标志基因HCN、Cx和Tn等;免疫细胞化学显示诱导后细胞可以表达起搏细胞相关标志物HCN,Cx和Tn;5-AZA诱导的细胞与静息心室肌细胞共培养后未发现自主搏动的细胞,而与窦房结共培养的DFAT细胞可以带动静息心室肌搏动。
结论:5-AZA、EBIO与窦房结细胞共培养都可以将DFAT细胞诱导分化为具有一定心肌细胞、起搏细胞表型的细胞,而与窦房结细胞共培养的DFAT细胞还可以带动静息心室肌搏动,更接近起搏细胞。
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