【摘 要】
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目的：构建细胞分裂周期蛋白(Cdc6) RNAi慢病毒载体.方法：采用RNA干扰序列设计原则，设计5个靶向Cdc6的RNA干扰靶点序列，构建靶向Cdc6的RNA干扰载体，同时采用PCR方法从cDNA文库
【机 构】
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510080广州,中山大学附属第一医院口腔颌面外科
【出 处】
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广东省口腔医学会第三次会员代表大会暨第十次学术会议
论文部分内容阅读
目的：构建细胞分裂周期蛋白(Cdc6) RNAi慢病毒载体.方法：采用RNA干扰序列设计原则，设计5个靶向Cdc6的RNA干扰靶点序列，构建靶向Cdc6的RNA干扰载体，同时采用PCR方法从cDNA文库钓取目的基因Cde6构建Cdc6过表达载体.两种载体共转染293T细胞进行外源筛靶，采用Western blot检测Cdc6蛋白表达情况，判断不同靶点的干扰效果，选择两条最佳RNAi有效靶点序列，制备靶向Cdc6的慢病毒载体.结果：成功构建Cdc6 siRNA表达质粒及Cdc6过表达载体质粒，经外源筛靶实验显示各实验组较NC组对Cde6基因表达均能起到不同程度的敲减作用，其中Target 3和Target 4靶点对目的基因的表达有显著的敲减作用，敲减率分别为：69.15％和84.85％.结论：成功构建两条靶向Cdc6RNAi慢病毒载体：Target 3和Target 4.
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