毛细管电泳法筛选蛋白质的核酸适配体的初步研究

来源 :2010年全国生物医药色谱学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Jason51090
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核酸适配体是指通过指数富集配体系统进化(systematicevolution of ligands by exponentialenrichment,SELEX)技术从随机寡核苷酸文库中筛选得到的高亲和性与特异性的寡核苷酸序列配体。毛细管电泳(capillaryelectrophoresis,CE)与SELEX技术中常用的亲和色谱、纤维膜过滤、凝胶电泳和磁珠分离等方法相比,分离过程简化,耗时短,分离效率高,且不会引入其它分离介质,因此在适配体筛选中可有效避免适配体与分离介质的非特异性作用。此外毛细管电泳技术还具有分离速度快,分辨率高,操作简单,样品用量少,研究成本低等明显优势. CE-SELEX己成为一种新型的筛选核酸适配体的有效方法。本研究采用平衡混合物的非平衡毛细管电泳方法研究三种蛋白质与随机寡核苷酸文库的亲和作用,为后续的适配体筛选奠定基础。分别将小分子量的具有生物功能的核糖核酸酶RNase A、中分子量的血清高丰度蛋白BSA和大分子量的免疫球蛋白IgG与荧光标记的80nt的寡聚核苷酸反应,得到寡核苷酸文库与目标蛋白质的混合溶液。采用毛细管区带电泳对混合溶液进行分离分析,表征蛋白质-DNA复合物的生成,并对其进行收集鉴定。
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