【摘 要】
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目的：通过对椎间盘软骨终板细胞内Ⅰ,Ⅱ型胶原mRNA的水平进行定量测定,进一步明确软骨细胞在损伤后纤维化修复过程中的细胞学功能变化规律.方法：选用健康新西兰兔40只,随机
【机 构】
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四川大学华西医院骨科 610041
【出 处】
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2015成都国际骨科论坛暨四川省医学会第19次骨科学术会议
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目的：通过对椎间盘软骨终板细胞内Ⅰ,Ⅱ型胶原mRNA的水平进行定量测定,进一步明确软骨细胞在损伤后纤维化修复过程中的细胞学功能变化规律.方法：选用健康新西兰兔40只,随机分为四个不同的实验组(1.纤维环穿刺组2.上位软骨终板单次穿刺组,3.上下位软骨终板多次穿刺组4.假手术组),分别于动物建模手术术后第2天、第2、8、12、24周在每组中随机选取2只实验动物获取椎间盘标本,逆转录聚合酶链反应RT-PCR测定椎间盘软骨终板细胞Ⅰ,Ⅱ型胶原mRNA水平.首先提取椎间盘软骨终板组织的RNA,通过核酸测定仪上测定RNA浓度及RNA浓度与蛋白浓度比值,采用Revertaid M-Mulv逆转录酶进行逆转录,设计Ⅰ、Ⅱ型胶原引物,建立PCR反应体系,用0.5×TBE电泳缓冲液配制2％的琼脂糖凝胶电泳(120V,40min),紫外灯下观察扩增结果,测定不同电泳条带的灰度值.结果：Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA的变化：术后各手术组Ⅰ型胶原mRNA水平在术后8周后呈现进行性上升的趋势,上升的幅度与损伤程度相关.
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