【摘 要】
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参考GenBank中沙门氏菌的inv A基因、鸭疫里默氏杆菌的Omp A基因、巴氏杆菌的KMT1T基因和大肠杆菌的Pho A基因序列,采用Primer Premier 5.0设计了4对特异性引物,对已分离、鉴
【机 构】
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贵州大学动物科学学院; 贵州大学动物疫病研究室;
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参考GenBank中沙门氏菌的inv A基因、鸭疫里默氏杆菌的Omp A基因、巴氏杆菌的KMT1T基因和大肠杆菌的Pho A基因序列,采用Primer Premier 5.0设计了4对特异性引物,对已分离、鉴定、保存的4种细菌进行单一PCR扩增,并通过优化退火温度与引物浓度建立了适合沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌、巴氏杆菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。4对引物分别扩增出与试验设计相符的832bp、663bp、460bp和261 bp的特异性基因序列,建立的多重PCR方法对葡萄球菌、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒和鹅细小病毒的核酸扩增结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌、巴氏杆菌和大肠杆菌的最小检出量分别为8.6 pg、4.4 pg、6.0 pg和10 pg。本试验建立的多重PCR方法具有特异性强、敏感性高和快速简便等特点,可用于沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌、巴氏杆菌和大肠杆菌快速鉴别诊断。
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