【摘 要】
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目的：应用改良差速贴壁法培养纯化绿荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞,以探求纯化小鼠骨髓间充质干细胞的最佳方法.方法：取6周龄GFP小鼠股骨全骨髓,采用贴壁法进行
【机 构】
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南方医科大学南方医院,南方医科大学口腔医学院
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目的：应用改良差速贴壁法培养纯化绿荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞,以探求纯化小鼠骨髓间充质干细胞的最佳方法.方法：取6周龄GFP小鼠股骨全骨髓,采用贴壁法进行体外培养,待细胞融合至80％ ～90％胰酶消化传代：A常规方法：常温下胰酶消化2分钟,将消化下来的细胞传代.B改良法：胰酶室温消化1 min,保留仍贴壁的细胞,37°条件下胰酶再次消化2min,弃去仍然贴壁的细胞,将第二次消化下的细胞接种,静置半小时后换液,弃去未贴壁细胞.荧光显微镜下观察各组贴壁细胞荧光状态、数量及形态学特征,MTT法绘制细胞生长曲线,体外诱导观察其成骨成脂能力,流式细胞术检测绿荧光蛋白表达率.结果：贴壁法获得数量较多,形态多样的原代细胞.随着传代次数的增加,细胞形态一致性不断增高.与传统传代方法相比,改良差速贴壁法更早获得纯度较高的细胞.传代不影响细胞GFP的表达及其增殖、分化潜能,使得纯化的BMSCs可作为示踪细胞进一步用于研究工作.结论：改良差速贴壁培养法可提高纯化BMSCs效率.
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