【摘 要】
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细菌、古菌、真菌和植物都具有支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)的生物合成途径。乙酰羟酸合成酶(AHAS)是支链氨基酸生物合成途径中的第一个关键酶。几乎所有物种(古菌除外)的 AHAS都含有两种亚基：催化亚基和调控亚基。亚基间的相互作用对酶行使功能至关重要。迄今为止,对于 AHAS的催化反应机制、调控亚基对催化亚基的激活机制以及支链氨基酸对全酶活性的反馈调控机制知之甚少。因此获得 AHAS 全酶
【机 构】
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南开大学化学学院,元素有机化学国家重点实验室,天津市卫津路94号,300071 南开大学生命科学学
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细菌、古菌、真菌和植物都具有支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)的生物合成途径。乙酰羟酸合成酶(AHAS)是支链氨基酸生物合成途径中的第一个关键酶。几乎所有物种(古菌除外)的 AHAS都含有两种亚基：催化亚基和调控亚基。亚基间的相互作用对酶行使功能至关重要。迄今为止,对于 AHAS的催化反应机制、调控亚基对催化亚基的激活机制以及支链氨基酸对全酶活性的反馈调控机制知之甚少。因此获得 AHAS 全酶的晶体结构对解释 AHAS 的这三种机制无疑是非常有帮助的。自 2002 年以来,AHAS催化亚基和调控亚基的晶体结构先后被解析,然而 AHAS 全酶的晶体结构因其稳定性等原因,未能成功解析。我们在结构及序列分析的基础上,通过 AHAS 催化亚基柔性片段的刚性替换,以及在蛋白的端基引入重金属结合标签(dLBT)两种方式,构建 AHAS 突变体蛋白,以提高 AHAS 酶的稳定性,为获得 AHAS全酶晶体结构进行了有益的探索,并取得了初步结果。
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