目的:利用化学生物学策略,设计合成生物素标记的灯盏乙素探针,以探针为工具和手段,寻找灯盏乙素抗肿瘤活性的蛋白靶点,阐述灯盏乙素的抗肿瘤作用机制。方法:（1）以灯盏乙素苷元与生物素为原料,合成生物素标记的灯盏乙素探针,用HPLC和MTS法考察其稳定性和抗肿瘤活性。（2）采用下拉实验（Pull-down assay）和蛋白质组学等方法寻找靶蛋白,并通过免疫共沉淀法加以验证。（3）紫外-可见分光光度法检测PKM2活性;全自动生化分析仪分析葡萄糖消耗和乳酸生成的速率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;以蛋白印迹法分析相关蛋白的表达情况。结果:（1）设计合成的三个探针（P4、P6和P10）经¹H-NMR、¹³C-NMR、HRMS进行了结构鉴定。细胞毒性研究表明,灯盏乙素探针P4和P10都表现出与灯盏乙素相当的细胞毒性。（2）通过Pull-downassay,发现在55kDa处有明显蛋白条带,蛋白质质谱鉴定,该条带可能是PKM2。通过免疫共沉淀,验证了探针P10与PKM2能够发生相互作用,最终确定灯盏乙素直接作用靶点为PKM2。（3）灯盏乙素能够抑制重组的和细胞内的PKM2活性,并能抑制Hela细胞糖酵解速率。灯盏乙素可阻滞Hela细胞于G2/M期,并下调与细胞周期相关蛋白CDK1-Cyclin B,通过上调Bax、cleaved-caspase 3、P53,下调Bcl-2、caspase 3,来诱导Hela细胞凋亡。灯盏乙素还可能通过MEK/ERK信号通路,能显著促进PKM2入核。结论:（1）本研究在合成小分子探针的基础上,应用蛋白质组学、免疫共沉淀等方法,发现了PKM2是灯盏乙素抗肿瘤的潜在靶蛋白。（2）初步探讨了灯盏乙素抗肿瘤作用机制,可能是通过抑制PKM2活性和PKM2入核共同发挥作用:一方面灯盏乙素可直接抑制PKM2在细胞质中丙酮酸激酶活性,降低肿瘤细胞的糖酵解速率;另一方面灯盏乙素通过激活MEK/EPK信号通路,促进PKM2入核,使其参加周期及凋亡基因的转录调控,导致肿瘤细胞G2/M期阻滞并引发细胞凋亡。（3）本研究首次发现了灯盏乙素是PKM2的抑制剂,为开发具有前景的相关靶向抗肿瘤药物提供了理论依据。