【摘 要】
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目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的膜型表达载体，为进一步制备其具有靶向作用的抗肿瘤的融合蛋白创造条件.方法:以葡萄球菌(ATCC 13565)的基因组DNA为模板，用两条针对SEA全长基因特异的引物，通过PCR方法克隆SEA全长基因；以表达C-erb-B2癌基因的卵巢癌细胞系HO-8910细胞的RNA逆转录产物cDNA为模板，用两条针对C-erb-B2基因序列中的跨膜(TM)区片段特异的引
【机 构】
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浙江大学医学院肿瘤研究所,杭州,310009 浙江大学医学院微生物教研室,杭州,310006
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目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的膜型表达载体，为进一步制备其具有靶向作用的抗肿瘤的融合蛋白创造条件.
方法:以葡萄球菌(ATCC 13565)的基因组DNA为模板，用两条针对SEA全长基因特异的引物，通过PCR方法克隆SEA全长基因；以表达C-erb-B2癌基因的卵巢癌细胞系HO-8910细胞的RNA逆转录产物cDNA为模板，用两条针对C-erb-B2基因序列中的跨膜(TM)区片段特异的引物，PCR扩增TM片段；采用剪接重叠延伸(SOE)法连接SEA和TM两个基因片段；融合基因片段SEA-TM与pGEM-T载体连接，经测序证实后进行亚克隆，构建其表达载体pET28b-SEA-TM.
结果:克隆了SEA-TM融合基因，经测序证实与GenBank中收录的序列完全一致；并构建了融合基因SEA-TM的表达载体.
结论:成功的克隆了融合基因SEA-TM并构建了其表达载体，为进一步对融合基因SEA-TM所表达的融合蛋白用于恶性肿瘤的靶向治疗奠定了坚实的基础.
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