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目的:研究中药有效组分复方ZL方(栀子苷+绿原酸)对实验性非酒精性脂肪肝的防治作用,围绕肝脏GLP-1受体相关信号通路及肝脂肪代谢关键环节,探讨该方治疗非酒精性脂肪肝的效应机制。
方法:1.ZL方治疗非酒精性脂肪肝的药效学观察实验:实验1:以先天瘦素受体基因缺失db/db小鼠为非酒精性脂肪肝动物模型,设正常对照组(同窝db/m小鼠)、模型组、ZL方低、中、高剂量组及罗格列酮组,各用药组药物干预4周.实验2:以高脂饮食14周诱导C57BL/6J小鼠为非酒精性脂肪肝动物模型,设正常对照组、模型组、ZL方组、栀子苷组、绿原酸组和罗格列酮组,各用药组药物干预4周.以上实验均取材后观察和检测:①一般情况、体重、肝湿重、肝体比等;②肝脂、肝功能等;③肝组织病理.2.ZL方作用机制研究实验:收集以上实验1中db/db小鼠和实验2中C57BL/6J小鼠的血清和肝组织等标本,运用Western Blotting蛋白印迹、ELISA蛋白定量分析技术和手段,围绕GLP-1相关信号通路及肝脂肪代谢关键环节,分析其相关蛋白表达情况等以研究ZL方作用机制。
结果:1.ZL方治疗非酒精性脂肪肝的药效学效应:实验1:ZL方均可明显减轻db/db小鼠体重、肝湿重,降低肝体比,均可降低肝脂、改善肝功能及肝组织脂肪病变程度.其作用均优于阳性对照药罗格列酮,且其量效关系也均呈正相关.实验2:ZL方可以明显减轻高脂饮食14周诱导C57BL/6J小鼠体重、肝湿重,降低肝体比,降低肝脂、改善肝功能及肝组织脂肪病变程度.且其作用优于其单一组分栀子苷和绿原酸. 2.ZL方的作用机制:ZL方上调肝组织GLP-1R表达,通过激活SIRT1-PGC1α/PPARα和SIRT1-AMPK(AMPK的激活促进NAMPT的表达进一步激活SIRT1)-ACC两条信号通路,上调MLYCD(MCD)表达,降低肝组织M-CoA含量,进而上调CPT1表达.ZL方还同时通过上调肝组织GLP-1R表达,激活cAMP-PKA信号通路,从而最终起到促进脂肪酸氧化、改善糖脂代谢、减轻肝脏脂肪病变、治疗NAFLD的作用。
结论:1.ZL方对非酒精性脂肪肝具有显著的、理想的防治作用,其作用优于其单一组分栀子苷、绿原酸,也优于阳性对照药罗格列酮,且其量效关系呈正相关.2.ZL方防治NAFLD作用的主要机制与激活GLP-1受体相关信号通路有密切关系。