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本研究采用RT-PCR方法,分别从鸭肺脏和骨髓组织中扩增到5个新的β-防御素基因,将测序结果与已发现的禽β-防御素(AvβD)和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树并进行同源性分析.结果显示,这5个基因分别是鸭AvBD1、鸭AvBD3、鸭AvBD5、鸭AvBD6和鸭AvBD16.其中,鸭AvBD1 eDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸,与鸵鸟AvBD1氨基酸同源性最高为78％；鸭AvBD3 cDNA大小为182 bp,编码60个氨基酸残基,与鸡AvBD3氨基酸同源性高达100％；鸭AvBD5cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸残基,与鸡AvBD5氨基酸同源性达97％；鸭AvBD6 eDNA大小为204 bp,编码67个氨基酸残基,与鸡AvBD6氨基酸同源性高达100％；鸭AvBD16 cDNA大小为155bp,编码50个氨基酸,与鸡AvBD3同源性最高,为62％.将这5个鸭AvBD基因分别亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1,转化大肠杆菌BL21,进行IPTG诱导表达.将表达的蛋白进行纯化,同时根据其各自的氨其酸序列分别合成相应的5条多肽.以4种革兰氏阳性菌和8种革兰氏阴性菌为检测菌,采用菌落计数法测定重组和合成的鸭AvBD1、鸭AvBD3、鸭AvBD5、鸭AvBD6、鸭AvBD16和GST蛋白的抗菌活性,以及盐离子浓度对其抗菌活性的影响.并对这些蛋白的溶血活性进行测定.结果表明,与GST标签蛋白相比,重组和合成鸭AvBD1、鸭AvBD3、鸭AvBD5、鸭AvBD6和鸭AvBD16蛋白对12种细菌均有显著的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01).在高盐浓度下,这些蛋白对四联球菌和多杀性巴氏杆菌的抗菌活性显著降低(P ＜0.05或P＜0.01).此外,这些蛋白溶血活性极低,与阴性对照相比,无显著差异(P＞0.05).本试验还测定了这5个重组蛋白的体外抗鸭肝炎病毒作用,结果表明,与阳性对照(病毒组)相比,这些重组蛋白显著延长了鸭胚的存活时间(P ＜0.05或P＜0.01),相反地,GST无显著作用(P＞0.05),表明这些重组蛋白具有抗鸭肝炎病毒的作用.为探讨这些鸭AvBDs基因在体内组织中的表达水平是否受鸭肝炎病毒诱导,及其抗病毒作用的信号转导机制.本研究以鸭肝炎病毒感染鸭,采用荧光定量PCR方法,分别检测了攻毒后24h、32h、48h、72h、96h鸭体内法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓、肝脏、肾脏和肺脏组织中这5个鸭AvBDs基因的表达量,以及几个细胞因子：鸭白介素-2(IL-2)、白介素-18 (IL-18)和γ干扰素(IFNγ),以及Toll样受体7(TLR7)基因在除肾脏和肺脏外的上述组织中的表达量.结果显示,经鸭肝炎病毒诱导后,除鸭AvBD1、鸭AvBD3和IFN-γ在肝脏中没有被诱导表达外,其余基因在肝脏组织中均被诱导表达或表达量显著上调(P ＜0.05或P＜0.01).此外,在攻毒后的各个时间点,也检测到这些基因在其他组织中发生诱导表达或表达水平显著上调(P＜ 0.05或P＜0.01).同时,本试验结果还显示,这些防御素和细胞因子在组织中的表达量与TLR7的表达量呈正相关.结果提示,这些鸭AvBDs与细胞因子在体内的抗病毒作用可能受TLR7介导的信号转导通路调控.