【摘 要】
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目的:建立快速准确的Lactobacillus.paracasei N1115活菌的荧光定量检测方法并应用于菌粉的活菌计数当中。方法:看家基因苯丙氨酰-tRNA合成酶o亚基基因(phenylalanyl-tRNA sy
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目的:建立快速准确的Lactobacillus.paracasei N1115活菌的荧光定量检测方法并应用于菌粉的活菌计数当中。方法:看家基因苯丙氨酰-tRNA合成酶o亚基基因(phenylalanyl-tRNA syntyase,pheS)基因,在乳酸菌间具有良好的种间差异,根据这一特性分析了副干酪乳杆菌N1115的苯丙氨酰-tRNA合成酶α亚基基因(pheS)序列并设计了特异性引物;叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)是一种能够与DNA紧密结合而阻断其DNA扩增的新型DNA染色剂,PMA能够通过受损的细胞膜进入死菌细胞内与死菌DNA结合,活菌则能够通过细胞膜阻挡PMA的进入,从而抑制死菌的扩增而不影响活菌的扩增,本实验利用这一原理使用PMA前处理待测样品,然后通过荧光定量PCR的方法(quantitive polymerase chain reacition,qPCR)检测菌粉中的N1115的活菌数,有效的排除了qPCR中假阳性扩增对实验的干扰。结果:经过验证得到了一对N1115的特异性引物:C15F、C15R;副千酪乳杆菌N1115在90℃水浴条件下热损伤时间为8min;PMA对于N1115死菌DNA的扩增有明显的抑制效果;PMA-qPCR方法能够快速准确的测得菌粉中副干酪乳杆菌N1115的活菌数。结论:建立了一种快速、准确的副干酪乳杆菌N1115活菌的荧光定量检测方法。
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