油菜黑胫病又称油菜黑腿病,其病原菌主要有两种:油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)和油菜黑胫病菌(L.biglobosa),油菜茎基溃疡病菌具有极强的致病力,是引起世界各地油菜黑胫病广泛传播及油菜产量损失的主要原因。该病菌引起的产量损失一般约为10%~20%,严重时可达30%~50%或更高。在加拿大、美国、澳大利亚和欧洲等油菜产区同时存在这两种致病菌。我国油菜产区气候与世界其他产油菜国家相似,且目前的油菜栽培品种高度感病,因该病菌对我国油菜产业的潜在巨大风险,2007年油菜茎基溃疡病菌列入我国检疫性有害生物名录。目前,用于油菜茎基溃疡病菌的检测方法主要有形态观察和传统PCR检测。等温扩增方法,环介导等温扩增(LAMP)也用于检测油菜茎基溃疡病菌,但LAMP方法普遍存在假阳性的问题。重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)技术被认为是可以取代PCR的核酸检测技术,捉操作简单,不需要复杂的仪器即可进行检测实验,已在转基因水稻,病原微生物检测领域有所应用。本研究采用RPA方法开发了油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans的快速检测。实时荧光RPA曲线表明在39℃恒温条件下,在6min就能检测到明显的荧光信号,在20min以内就可完成检测(图)。笔者设计的引物和探针可检测到0.021 4ng L.maculans基因组DNA,而不扩增L.biglobosa和其他黑胫病真菌。RPA快速扩增的优点可用于开发口岸大量样品检测的快速筛查方法。