【摘 要】
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目的建立检测HIV-1p24 TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应系统(HIV-1 p24 TaqMan FQ-PCR),并初步探索其应用于实验室和临床的标本检测。方法 RNA抽提、反转录、PCR及载体构建的
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室;
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目的建立检测HIV-1p24 TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应系统(HIV-1 p24 TaqMan FQ-PCR),并初步探索其应用于实验室和临床的标本检测。方法 RNA抽提、反转录、PCR及载体构建的方式得到重组质粒pEGFP-N1-p24,并以此为模板用PCR扩增p24并建立标准曲线。通过与其他试剂盒检测实验室及临床样本HIV-1 p24载量,以验证该检测系统的可靠性、特异性、灵敏性和稳定性。结果不同检测方法比较显示:HIV-1 p24 TaqMan FQ-PCR的HIV-1真阳性率为100%,假阳性率0%,并且与国内同类某HIV-1荧光定量检测试剂盒检测50份HIV-1阳性病人外周静脉血检测的样本平均值无统计学差异;此外,检测同一标本的结果以及单用TaqMan FQ-PCR系统独立3次对同一样本检测结果变异系数均<5.09%。结论 HIV-1p24 TaqMan FQ-PCR检测系统具有经济、可靠、灵敏度高、高特异性、稳定等特点,可初步用于实验室和临床样本检测。
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