【摘 要】
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本试验构建了H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)HA基因表达质粒，基因免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠，加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。通过ELISA、HI试验筛选阳性克隆。应用ELISA、HI试验和Western blot试验测定McAb的反应性和特异性。共获得3株分泌抗H1亚型猪流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为8C4、
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
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本试验构建了H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)HA基因表达质粒，基因免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠，加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。通过ELISA、HI试验筛选阳性克隆。应用ELISA、HI试验和Western blot试验测定McAb的反应性和特异性。共获得3株分泌抗H1亚型猪流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为8C4、8C6、9D6。McAb腹水ELISA效价在1:16000～1:256000之间；HI效价为1:512～1:256000；对A/Swine/Guangdong/LM/2004的中和效价分别为：10-2.83、10-6.4、10-5.8。Western blot分析结果显示，3株McAb只与H1亚型猪流感病毒HA蛋白反应。HA蛋白特异性McAb的研制为H1抗原变异分析及H1亚型猪流感诊断方法的建立奠定了物质基础。
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以纯化的猪附红细胞体(EH)免疫BALB/c小鼠，运用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，并用间接ELISA方法进行筛选，经间接ELISA方法、免疫印迹和间接免疫荧光试验进行鉴定，共获得5株分泌抗猪附红细胞体单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞，分别命名为1H1、1H2、3A5、5B1和7E11，其单抗亚类鉴定分别属于IgG2b、IgG1、IgG2b、IgG2b和IgG2b。这5株McAb均能与猪附红细
将TGEV、PEDV、PRV接种PK15细胞观察细胞病变，将细胞反复冻融三次收获病毒，并对病毒增值纯化。根据GenBank中已发表各病毒基因序列设计特异性引物，以病毒RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出TGEV-S、PEDV-M、PRV-VP6基因，相应的片段分别长410bp、501bp、432bp。将扩增的目的基因连接到pMD18-T载体上，经蓝白斑筛选出阳性克隆进行序列测定。用DNAStar
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应用14个微卫星标记分析了BWEL-SPF鸡群在F15世代群体内和群体间的遗传变异，结果表明由于长期的近交已经使相当一部分位点(35.7％；5/14)的基因型趋于纯合(＞0.90)而被固定下来，群体内等位基因的变异程度显著降低。但在F15代改变传代方式后，多数家系(7/8)的FIS估计值为负值，其中有4个达到了显著水平(P＜0.05)，这表明经过长期垂直传代的家系内的近交在一定程度上得到了缓解。F
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