S6K1基因沉默对肝脏胰岛素抵抗的影响及作用机制

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目的:利用RNA技术制备的S6K1重组基因腺病毒(S6K1Ax),将db/db小鼠肝脏S6K1基因特异性沉默后,观察对小鼠肝脏胰岛素抵抗的影响并分析其作用机制。方法:将制备的shS6K1Ax注射进db/db小鼠尾静脉,以注射pU6Ax的db/db小鼠作对照组。在第6日进食及空腹状态时处死小鼠取肝脏,提取肝脏蛋白利用Western blot及免疫沉淀的方法观察[RS1、IRS2及其酪氨酸磷酸化蛋白、Akt1及ser473Akt的表达,提取肝脏总RNA用逆转录-PCR法检测糖异生基因PGC1α、PEPCK、G6PasemRNA的表达。病毒注射前后尾静脉取血分离血清测定血糖、胰岛素、FFA、TG、CHO、ALT等,胰岛素测定采用酶联免疫吸附法(ELISA),FFA、TG、CHO、ALT测定采用比色法。结果:与对照组相比,在进食及空腹状态实验组IRS1、IRS2的蛋白表达均增强,但IRS1、IRS2酪氨酸磷酸化水平只有在空腹时才较对照组表达增强,进食状态两组没有差异。Akt蛋白表达没有差异,空腹时ser473Akt实验组较对照组表达增强,进食状态两组没有差异。逆转录PCR结果显示在空腹状态下S6K 1Ax注射组与对照组相比,糖异生基因mPGC 1α、mPEPCK、mG6Pase表达均下降,差异有统计学意义(P<0.01)。血清测定显示空腹血糖S6K1Ax注射组呈下降趋势,但未有统计学差异(P>0.05),空腹状态血清胰岛素水平均较对照组上升(P<0.01),无论空腹及进食状态胆固醇CHO均较对照组下降(P<0.01),FFA只在空腹S6K1Ax注射组表现了下降。ALT在各组及注射前后比较均没有差异。结论:在db/db小鼠肝脏S6K1基因沉默后,对肝脏胰岛素抵抗有改善作用,特别在空腹状态时,胰岛素信号传导增强,糖异生水平下降,S6K1可作为肝脏胰岛素抵抗治疗的一个基因靶目标。
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