【摘 要】
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本项研究根据GenBank公布的BVDV-NADL株Erns(EO) ,E2基因的核苷酸序列，设计引物，采用PCR技术从pACNR/NADL质粒中扩增Erns,E2基因，构建原核表达质粒pET-32a-Erns,pET-32a-E2，将其转化至大肠埃希菌BL21中，经IPTG诱导，用SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白的表达情况及其反应原性。将牛病毒性腹泻病毒接种长满单层的MDB
【机 构】
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新疆石河子大学动物科技学院,新疆石河子832003
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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本项研究根据GenBank公布的BVDV-NADL株Erns(EO) ,E2基因的核苷酸序列，设计引物，采用PCR技术从pACNR/NADL质粒中扩增Erns,E2基因，构建原核表达质粒pET-32a-Erns,pET-32a-E2，将其转化至大肠埃希菌BL21中，经IPTG诱导，用SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白的表达情况及其反应原性。将牛病毒性腹泻病毒接种长满单层的MDBK细胞，接种72 h后，收取病毒液。将全病毒灭活，免疫双峰驼。分离外周血淋巴细胞，并提取总RNA，反转录成cDNA。采用巢式PCR技术扩增重链抗体可变区基因的核苷酸序列，构建噬菌体展示载体，经过多次连接转化TG1感受态细胞，构建初始文库。利用M13K07辅助性噬菌体超感染构建噬菌体展示anti-BVDV纳米抗体文库。研究结果表明成功构建牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白Erns,E2的原核表达载体，经诱导表达目的蛋白分别为45KD,64KD左右，经Ni-NTA蛋白纯化仪纯化蛋白，获得纯度较高的蛋白。Western blot试验表明目的蛋白具有很好的反应原性。以cDNA为模板，扩增驼源重链抗体可变区序列，构建库容量为4.32×105初始文库，并经过辅助噬菌体的超感染，成功构建噬菌体展示纳米抗体文库，库容量大小约为1.3×1011。为后续利用BVDV的囊膜蛋白Erns,E2作为抗原筛选具有高亲和力、高特异性的抗BVDV的纳米抗体奠定基础。
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