【摘 要】
：
为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗,本研究采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(PoIL-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1(+)真核表达栽体中;筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA
【机 构】
：
河南省动物疫病预防控制中心,郑州 河南 450008
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
论文部分内容阅读
为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗,本研究采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(PoIL-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1(+)真核表达栽体中;筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)转染COS-7细胞,分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2)生物学活性;提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和只含PCV2 ORF2基因的重组表达质粒pcDNA3.1/OFR2(rpcDNA3.1/OFR2)免疫Balblc小鼠和猪并检测其免疫效果.结果表明:成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3.1(+)重组表达质粒:rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞浆内进行了表达,表达的rCap-linker-PoIL-2可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应,表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重生物学活性;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠和猪体产生明显的抗PCV2抗体,且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3.1/OFR2.
其他文献
戊型肝炎以往称非甲-非乙型肝炎,由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的一种自限性疾病.目前,戊型肝炎病毒主要分为5个基因型(基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型),并且,不同的基因型存在许多亚型.不同基因型在基因结构有所不同,基因4型的全基因序列在ORF3的第二密码子AUG后插入一个U,从而改变了基因组下游的阅读框架.不同HEV基因型在地理分布上有各自的特点,并且呈现复杂性的特征.
犬巴贝斯虫病是由巴贝斯虫引起的以蜱为媒介的血液寄生虫病。引起该病的病原主要有犬巴贝斯虫、吉氏巴贝斯虫和韦氏巴贝斯虫3种。2002—2005年，笔者在宠物门诊工作过程中，通过对161例犬巴贝斯虫病的诊治与跟踪调查，结果表明：治愈148只，死亡13只，治愈率达91.93％(见表1)；同时将这些病例按不同类型的巴贝斯虫感染的，进行归纳分类。本文将对该病的治疗与预防体会进行总结。
本研究扩增了A组猪轮状病毒标准株OSU株非结构蛋白基因NSP4,构建了重组质粒pMD-19T-NSP4,经过序列分析该基因与报道的OSU株核苷酸序列同源性为81％,氨基酸同源性为83％,主要变异区段集中在C末端.该毒株更趋向于人轮状病毒,它与人轮状病毒R293株核苷酸同源性为93％,与氨基酸序列同源性为95％.另外,还构建了重组质粒pEGFP-N1-NSP4,将其转染至COS7细胞,发现pEGFP
副粘病毒可以引起一系列猪病,给养猪业带来了重大损失,同样给人类带来的严重的威胁.国内关于猪副粘病毒病的最早报告是在2000年,本实验室于2006年在发病猪体内分离出一病毒,后经分子鉴定属于副粘病毒,为禽副粘病毒Ⅰ型(APMV-1),并对其进行了生物学特性分析.
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,通过间接ELISA方法对融合细胞进行筛选,阳性细胞经有限稀释法进行4次亚克隆后,获得了3株能稳定分泌抗重组N蛋白抗体的杂交瘤细胞,分别命名为JY(4)-1、JY(4)-2、JY(4)-3.间接ELISA检测3株杂交瘤细胞的细胞培养上清及免疫小鼠制备的腹水和血清中的抗体效价均为1:512、1
将猪细小病毒(PPV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用ELISA方法筛选,以有限稀释法稀释3次,得到分泌抗PPV单克隆抗体(McAb)细胞株15株,并对其进行较详细的染色体计数、抗体亚类、ELISA交叉实验、Western blotting等生物学特性鉴定.染色体计数发现其核内染色体数均符合杂交瘤细胞染色体数,抗体属性为IgG1,交又实验等特异性分析发现该单抗只
首先以本室构建的包含Aisa 1型FMD流行毒株JL株全长P1-2A基因为模板,扩增出上游包含EcoR Ⅰ和下游包含有Xho Ⅰ的P1-2A基因,长度为2250bp.并克隆到pMD18T载体上,转入JM 109中.然后,将P1-2A基因连接到原核表达栽体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-6p-1-P1-2A,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达.SDS-PAGE电泳表明,P1-2A基因
口蹄疫病毒P1和3C基因联合表达能够产生完整的口蹄疫病毒衣壳蛋白,并形成无核酸的与原病毒外形一致的全新的空衣壳,该空衣壳具有与口蹄疫病毒颗粒相同的抗原特性,免疫动物后能诱导产生抗口蹄疫病毒特异性中和抗体,是开发安全高效口蹄疫重组疫苗的理想途径.本文对口蹄疫P1、3C基因及其对应的蛋白功能和P1、3C基因联合表达研究最新进展进行综述,对P1、3C基因联合表达重组疫苗的潜在优点也进行了讨论.
利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针.特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA.猪细小病毒(PPV)DNA、猪圆环病毒(PCV)DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)cDNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA的杂
根据发表的猪圆环病毒2型(PCV 2)ORF2基因序列,设计合成一对特异性引物,从分离到的PCV 2吉林株(JL 01)中扩增出PCV 2 ORF2 579bp的核苷酸片段,经BamHI和HindⅢ晦切后转入到表达栽体pET-32a,经鉴定获得阳性重组表达质粒pET-32a-ORF 2,将其转化到表达宿主菌BL21中,经IPTG诱导,成功表达了ORF2基因编码的部分结构蛋白,分子量为40Ku,表达