铜诱导型启动子驱动IbCHS和IbMYB基因表达载体的构建及其对烟草的遗传转化

来源 :广东省植物学会2012年年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JGTM2000
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  铜诱导型启动子可以在铜离子的诱导下被激活,进而启动下游目的基因的表达,而IbMYB和IbCHS分别是紫心甘薯花青素合成途径中的调控基因和关键酶基因,其过量表达均能够促进花青素的积累,从而使组织着色.本研究拟利用铜诱导型启动子来调控植物花青素的合成,为培育人工控制色泽的转基因植物提供理论和技术基础.本研究采用分子克隆技术,构建了含铜诱导型启动子驱动IbMYB 和IbCHS 基因的植物双元表达载体和农杆菌工程菌株;采用农杆菌介导法,获得转基因烟草植株并对其进行了鉴定与分析.主要研究结果如下:1)克隆获得了ACE1、IbCHS、IbMYB、GFP 的基因全长,通过与人工合成的MRE序列重组,构建了含铜诱导型启动子的双元表达载体,并进行了测序验证.2)采用农杆菌介导的叶盘转化法,将各双元表达载体转化烟草,成功获得了经PCR鉴定的转基因烟草植株.3)将转基因烟草的叶盘置于含不同浓度铜离子的培养基上培养,叶盘颜色表现出不同程度的加深,并明显深于空白对照和阴性对照.以上研究结果显示,可以通过铜诱导型启动子驱动花色素苷合成酶基因的表达,从而实现转基因植物叶片的人工诱导着色.
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