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目的:细胞焦亡是伴随炎症的程序性细胞死亡(PCD)方式,其中NLRP3炎性小体介导的焦亡与外源物诱导活化、肝毒性及损伤有关。环氧合酶2 (COX-2)可被促炎因子诱导表达并参与外源物介导的区域炎症反应;其可通过C末端与内质网关联性降解(ERAD)核心蛋白Derlin 1的结合而经由蛋白酶体降解。但是,COX-2蛋白修饰(如磷酸化)对其定位分布及调节NLRP3炎性小体活化的功能有待探讨。本研究拟探讨COX-2磷酸化状态对其在胞内分布及功能的影响,探索蛋白磷酸酶2A (PP2A)经由COX-2去磷酸化调控参与NLRP3炎性小体活化介导黄曲霉毒素B1 (AFB1)诱导肝细胞焦亡的分子机制。方法:利用GEO数据库分析相关基因表达的关联性;采用诱导分化的人正常肝HepaRG细胞,建立AFB1暴露模型;利用si PTGS2联合处理组建立干预模型;构建COX-2高表达及COX-2中Ser582、583、584、586、601各位点高磷酸化(S突变为D)和去磷酸化(S突变为A)的人正常肝L02定点突变细胞株进行功能学位点筛查和验证。WB检测NLRP3炎性小体相关蛋白(NF-?B p65、NLRP3、ASC、p10、IL-1β、GSDMD)及COX-2水平,qRT-PCR检测PTGS2mRNA水平,激光共聚焦技术检测COX-2与NLRP3的表达、以及与线粒体的定位,LDH释放检测细胞质膜破裂,ELISA检测上清IL-1β释放,IP检测COX-2与Derlin 1或B55δ的蛋白相互作用。结果:(1)与对照组相比,AFB1处理组COX-2的mRNA和蛋白水平增高;与AFB1组相比,si PTGS2干预的AFB1处理细胞中NLRP3炎性小体相关蛋白表达降低,NLRP3表达及其与线粒体的共定位减少,LDH释放和上清IL-1β水平降低。(2)与L02-PTGS2细胞相比,NLRP3炎性小体相关蛋白表达和上清IL-1β释放在L02-S601A细胞中增高,在L02-S601D细胞中降低;与L02-S601A细胞的AFB1处理组相比,L02-S601D细胞中COX-2与Derlin 1的相互作用增强。(3) AFB1暴露的HepaRG细胞数据库(GSE25844)中,PPP2R2D水平显著升高(P<0.05),且与PTGS2和焦亡相关基因表达相关;HepaRG细胞中AFB1处理组COX-2与B55δ互作条带增强;L02-S601A细胞中COX-2 (Flag)与B55δ互作条带在AFB1处理组中增强。结论:COX-2蛋白C端(Ser601)磷酸化修饰调节其ER定位和ERAD,PP2A-B55?直接靶向COX-2中Ser601去磷酸化可促进NLRP3的线粒体募集及组装激活,参与调控AFB1诱导的肝细胞炎症依赖性焦亡;为外源物诱导肝细胞炎症反应和肝脏区域免疫毒性的靶向调控和干预提供线索。