海洋寡糖具有多种生物学功能,已被应用于医药保健、农业等领域。酶法制备海洋寡糖具有清洁环保、特异性高等优势,已得到研究者的重视。酶法制备的核心是获得具有高效降解功能的多糖降解酶/裂解酶。本课题组进行了系列海洋多糖降解酶筛选鉴定及机制研究:筛选得到四株具有较好降解海藻酸钠能力的海洋弧菌、黄杆菌。从黄杆菌中克隆得到两个海藻酸钠裂解酶Alg2A和Alg2B,对其进行了酶学性质、动力学研究、底物偏好性和酶解产物分析。从海洋弧菌中鉴定得到了系统的海藻酸钠降解酶系,目前已克隆鉴定了其中三个功能不同的酶。分离到一株高产几丁质酶的交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-06),从中克隆得到了两个几丁质酶和一个几丁质氧化还原酶,几丁质酶ChiA为糖基水解酶18家族,含有几丁质结合域和PKD域,是非行进式的低温内切几丁质酶。筛选得到了一株降解壳聚糖的棒曲霉菌株(Aspergillus clavatus),从中克隆得到一个壳聚糖酶,为糖基水解酶75家族,重组表达纯化后进行酶学性质研究,该酶最适pH为6.0,最适温度为55℃,酶活可达24,500 U/g。系统鉴定了一株可降解卡拉胶的菌13-Q,为土地杆菌属新菌株。分离得到其中一个卡拉胶纯酶并进行研究,其最适pH为7.0;最适温度为40℃,具有κ-卡拉胶底物特异性,产物为四糖、六糖、八糖。