【摘 要】
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背景与目的:长期以来,肺癌一直占据全球癌症发病率及死亡率的首位.TKI类药物的发现使得肺癌化疗患者的长期生存率得以明显提高,为肺癌化疗的新突破.而其耐药性的产生备受关注,EML4-ALK,为近年来新发现的融合基因,其与EGFR突变,K-ras突变的不共存现象以及含有该基因患者的鲜明临床特征,提示该靶点是肺腺癌特异性较高的分子标记物,拥有这类基因的患者对TKI类药物不敏感,可能是肺癌TKI耐药相关的
【出 处】
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中国抗癌学会肺癌专业委员会第十二届全国肺癌学术大会
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背景与目的:长期以来,肺癌一直占据全球癌症发病率及死亡率的首位.TKI类药物的发现使得肺癌化疗患者的长期生存率得以明显提高,为肺癌化疗的新突破.而其耐药性的产生备受关注,EML4-ALK,为近年来新发现的融合基因,其与EGFR突变,K-ras突变的不共存现象以及含有该基因患者的鲜明临床特征,提示该靶点是肺腺癌特异性较高的分子标记物,拥有这类基因的患者对TKI类药物不敏感,可能是肺癌TKI耐药相关的新分子靶点,对诊断治疗等可能有重要作用.本实验的具体目的是:首先利用分子克隆技术构建最常见的EML4-ALK融合基因的V1亚型和V3亚型的真核细胞表达载体，进而通过脂质体瞬时转染技术初步探讨其对肺癌吉非替尼高度敏感细胞株PC-9(EGFR 19外显子del-E746-A750突变)生物学行为的影响及耐药性的改变情况;同时，筛选建立稳定转染EML4-ALK Vl或EML4-ALK V3亚型表达载体的肺癌细胞株。从而为进一步在肺癌中研究EMLfI-ALK的生物学功能奠定初步的实验基础。
方法:(1)应用分子克隆技术，构建pcDNA3.1-EMIR-ALK-V3型表达质粒，为后续实验奠定基础。(2)应用RT PCR和Western blot等技术分别从mRNA和蛋白水平验证经过基因转染后的EML4-ALK融合基因在肺癌细胞株中的表达情况，并以EML4-ALK阳性表达的肺癌细胞株H2228作为阳性对照;
结果:(1)应用分子克隆技术成功构建了pcDNA3.1-EML4-ALK-V3真核表达质粒，并经酶切和DNA测序分析得到确认。(2)应用RT PCR和Western Blot分别在PC-9细胞株中证实了转染pcDNA3.1-EMIR-ALK的细胞系成功表达了EML4-ALK融合蛋白;进一步结合6418的筛选，初步建立了稳定转染的PC-9-pcDNA3.1-EML4-ALK-V3细胞株;
结论:(1)成功构建了pcDNA3.1-EML4 ALK-V3真核细胞表达载体，并建立了稳定转染的PC-9-pcDNA3.1-EML4-ALK-V3细胞系，为进一步深入研究EML4-ALK融合基因的生物学功能奠定了基础:(2)pcDNA3.1-EML4-ALK转染后可增加人肺癌细胞株PC-9对吉非替尼的耐药性，提示EMIR-ALK可能与EGFR TKIs的耐药性有关。
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背景与目的：EML4-ALK,为近年来新发现的融合基因,具有这类基因的患者对TKI类药物不敏感,可能是肺癌TKI耐药相关的新分子靶点.EML4-ALK在肺癌发生发展中的作用机理尚不清楚.因此研究EML4-ALK融合基因在肺癌中的生物学功能,探讨其与EGFR-TKIs的相互作用机理,必将为深化肺癌的分子靶向治疗奠定基础.方法：利用分子克隆技术构建EML4-ALK融合基因的V1亚型和V3亚型的真核细胞
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