【摘 要】
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目的 构建大鼠微小RNA-1重组慢病毒表达载体,稳定转染L6成肌细胞,观察微小RNA-1过表达对其增殖分化及组蛋白去乙酰化酶(HDAC4)表达水平的影响.方法 构建表达含微小RNA-1
【出 处】
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全国手部功能重建研讨会、中华医学会手外科学分会华北地区第十届手外科学术会议暨内蒙古自治区第三届手外科学术会议
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目的 构建大鼠微小RNA-1重组慢病毒表达载体,稳定转染L6成肌细胞,观察微小RNA-1过表达对其增殖分化及组蛋白去乙酰化酶(HDAC4)表达水平的影响.方法 构建表达含微小RNA-1的重组慢病毒载体,并对载体进行测序和鉴定,稳定转染L6细胞后,用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR,Taqman 探针)的方法检测微小RNA-1的表达水平；细胞计数实验(CCK-8试剂盒)评价微小RNA-1过表达后对L6细胞增殖的影响.诱导稳定转染的L6成肌细胞进行分化,观察微小RNA-1过表达后对L6细胞分化的影响.以Western blot法检测微小RNA-1过表达后,α肌动蛋白(skeletalα-aetin),组蛋白去乙酰化酶(HDAC4)表达水平的变化.结果 微小RNA-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定正确,转染48h后,L6细胞微小RNA-1表达显著上调(P＜0.01),细胞计数实验表明L6细胞增殖无显著变化,细胞分化实验显示,过表达微小RNA-1的L6细胞分化明显加快,α肌动蛋白(skeletalα-aetin)表达显著升高.HDAC4的表达水平逐渐下降.结论 1.成功构建微小RNA-1慢病毒表达载体,稳定转染L6成肌细胞后高效表达微小RNA-1,促进了L6成肌细胞的分化,其机制与抑制HDAC4的表达相关.2.微小RNA-1与HDAC4在肌细胞分化过程中发挥重要作用,可作为失神经萎缩防治的重要靶点.
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